本試劑盒僅供研究使用,。

使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中總膽固醇（TC）含量。

   實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中人總膽固醇（TC）水平,。用純化的人總膽固醇（TC）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的總膽固醇（TC）標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的總膽固醇（TC）待檢樣品，溫育后,，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的總膽固醇（TC）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人總膽固醇（TC）濃度,。
    試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶 
 
9 標(biāo)準(zhǔn)品S1（18 nmol/L） 0.5ml×1瓶
2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S2（12 nmol/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 標(biāo)準(zhǔn)品S3（6 nmol/L） 0.5ml×1瓶
4 生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體 6ml×1瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S4（3 nmol/L） 0.5ml×1瓶
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S5（1.5nmol/L） 0.5ml×1瓶 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1個(gè)
7 終止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3張
8 樣品稀釋液 6ml×1瓶 12 說明書 1份

 
   標(biāo)本要求
1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
   操作步驟
   1.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
   2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔,。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育45分鐘。
   3.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
   4.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次,，拍干,。
   5.加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl,。37℃溫育30分鐘
   6.洗滌：操作同4。
   7.加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
   8.洗滌：操作同4,。
   9.顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
   10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
   11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
    計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。
    注意事項(xiàng)
    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)  包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
    2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
    3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
    4． 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）,。
    5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
    6．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存,。
    7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
    9. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。
    線形范圍： 1nmol/L -20nmol/L
    規(guī)格：96人份/盒
    保存條件及有效期
    1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
    2．有效期：6個(gè)月
 

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