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資料簡介
本試劑盒只能用于科學研究,，不得用于醫(yī)學診斷。
犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）定量檢測試劑盒（ELISA）
使用說明書
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒試劑盒名稱】
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒試劑盒用途】
定量檢測血清,、血漿及相關液體,。
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品,、待測樣本加入到預先包被犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）單克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分,，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）含量,。
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒試劑盒組成】
| 1 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑A液 | 6mL |
| 2 | 標準品 | 0.3mL×6管 | 8 | 顯色劑B液 | 6mL |
| 3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 終止液 | 6mL |
| 4 | 樣本稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 特殊稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 酶標試劑 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1,、37℃恒溫箱
2、標準規(guī)格酶標儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4,、蒸餾水
5、一次性試管
6,、吸水紙
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒操作步驟】
1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘,。
2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。
4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加,。
7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min,。
10,、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）,。
11、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。
3、樣本應充分離心,，不得有溶血及顆粒,。
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2、酶標包被板開封后如未用完,，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（6.25-200ng/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6,、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間,。
7,、為避免交叉污染，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣,，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜,。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用,。
9,、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒操作程序總結】
準備試劑,，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘
洗板4次,，加入酶標試劑,，37℃反應30分鐘
洗板4次，加入顯色液A,、B,，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒檢測范圍】
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒規(guī)格】
96人份/盒 48人份/盒
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒貯藏】
2-8℃，避光防潮保存,。
【犬乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒有效期】
6個月
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