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大鼠胱抑素C(CysC)說明書AE96022Ra

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    2013年03月12日
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胱抑素C,CysC,胱抑素試劑盒
上傳者
上海聯(lián)碩生物科技有限公司
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資料簡(jiǎn)介

                          

大鼠胱抑素C(CysC)酶聯(lián)免疫檢測(cè)

      試劑盒使用說明書              AE96022Ra

使用前仔細(xì)閱讀本說明書酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,,來檢測(cè)大鼠胱抑素C(CysC),,只能用于研究用途不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

    用于大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中胱抑素C(CysC)測(cè)定。

工作原理

本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA)測(cè)定樣品中大鼠胱抑素C(CysC)水平,。向預(yù)先包被大鼠胱抑素C(CysC)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入胱抑素C(CysC),,溫育;溫育后,,加入生物素標(biāo)記的抗P抗體,。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,,再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶,,然后加入底物A、B,,產(chǎn)生藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠胱抑素C(CysC)的濃度呈正相關(guān),。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

封板膜

2片(48

2片(96

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品4800μg/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素標(biāo)記的抗P抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

需要而未提供的試劑和器材

1. 37恒溫箱。

2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水,,

5. 一次性試管

6. 吸水紙

注意事項(xiàng)

1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差

3. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

4. 免交叉污染,,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜,。

5. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。

6. 底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,,重復(fù)此過程數(shù)次,。

自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中

標(biāo)本要求 

1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

操作程序

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)

2400μg/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1200μg/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

600μg/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

300μg/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

150μg/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。

3. 加樣:1)空白孔,,空白對(duì)照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗CysC抗體,,鏈霉親和素-HRP,,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同,;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,故不加),;3)代測(cè)樣品孔:加入樣本40ul,,然后各加入CysC抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,,蓋上封板膜,,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘,。

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

7. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

8. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

9. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。

操作程序總結(jié):

檢測(cè)范圍:60μg/L→2400μg/L,。

保存:2-8

有效期:6個(gè)月(2-8℃),。

免責(zé)聲明

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