石蠟包埋組織切片免疫染色

實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）：

石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度

1.烤片： 將待做切片置于切片架上,，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr,；

2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ,、Ⅱ、Ⅲ）,，每次

10 min,；

3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇 5min,，95%乙醇 2 次（每次 2min）,，85%

乙醇 2 min；75%乙醇 2min,，自來水沖洗,，ddH2O 洗 2×2min；

4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),，常采用高壓,、微波（溫

度達(dá)到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻,，自來水沖洗,，ddH2O 洗 2×

2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù),，

直接進(jìn)入第 5 步封閉,。

5.封閉： 滴加試劑 B,，37℃濕盒孵育 30 min,；

6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗）,，37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；

7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）,；

8.封閉： 滴加試劑 B,，37℃濕盒孵育 10 min；

9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D）,，37℃濕盒中孵育

30 min,；

10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

11.封閉： 滴加試劑 Tween 20,，37℃濕盒孵育封閉 20 min,；

12.加 HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM）,，

37℃濕盒中孵育 30 min,；

13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）,；

14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色,；

15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染,，脫水,，透明；

16.封片： 待組織標(biāo)本干后,，用試劑緩沖甘油封固劑封片,；

17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。