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人可溶性腫瘤壞死因子受體-1（sTNF-R1）ELISA試劑盒

 （用于血清,、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內）

原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗人 sTNF-R1 單抗包被于酶標板上,，標準品和樣品中的 sTNF-R1與單抗結合，加入生物素化的抗人sTNF-R1,，形成免疫復合物連接在板上,，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色,，zui后加終止液硫酸,，在450nm處測OD值，sTNF-R1濃度與OD值成正比,，可通過繪制標準曲線求出標本中sTNF-R1濃度,。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準備試劑與收集血樣

1.          收集標本：血清、血漿（EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素抗凝）,、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存,，避免反復凍融,。

2.          標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液,。設標準管8管,，每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入4000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,，移至第二管,。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出300ul棄去,。第八管為空白對照,。

3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4.         洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1.          加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul,，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘,。

2.          洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干,。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.          洗板：同前,。

5.          每孔加酶標抗體工作液100ul,。將反應板置37℃30分鐘。

6.          洗板：同前,。

7.          每孔加入底物工作液100ul,，置37 ℃暗處反應15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻,。

9.          30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值,。

結果計算與判斷

1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2.          以標準品2000,、1000,、500、250,、125,、62.5、31.2,、0 pg/ml為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線,。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應sTNF-R1含量,。

試劑盒性能

             1.   靈敏度：zui小的sTNF-R1 檢測濃度小于16pg/ml。

2.        特異性：可同時檢測重組或天然的人sTNF-R1,。不與人其它細胞因子有交叉反應,。

3.        重復性：板內、板見變異系數(shù)均小于12％,。

注意事項

             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,，每次測定應同時做標準曲線。

 2.   洗滌過程很關鍵,。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高,。

             3.   板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥,。

             4.   本試劑盒宜置4^oC冰箱保存,。

 5.   本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷,！