毛細(xì)管色譜柱的使用技術(shù)及常見故障

1． 毛細(xì)管的安裝

毛細(xì)管柱的安裝常為人們所忽視，往往會出現(xiàn)作填充色譜柱多年的技術(shù)人員,，剛使用毛細(xì)管柱時,，做出的色譜圖還不如填充柱的色譜圖，這使人們很難理解,。但究其原因,，多數(shù)是由于毛細(xì)管柱的安裝和操作上的毛病，而不是柱子本身和儀器系統(tǒng)的問題,。因此,，一根好的毛細(xì)管柱和設(shè)計得很好的色譜系統(tǒng)，還必須使柱子在系統(tǒng)中安裝得合理,，才能做出好的結(jié)果,。
1.1毛細(xì)管柱與進(jìn)樣器的連接
   對于分流進(jìn)樣，毛細(xì)管柱的入口端一定要伸過分流進(jìn)樣器的分流出口,，亦就是使毛細(xì)管柱的入口處于載氣的高流速區(qū)域,。如果毛細(xì)管柱的入口在分流進(jìn)樣器的分流出口以下，處于載氣的低流速區(qū)域,，得到的色譜圖還不如填充柱,，所以必須將毛細(xì)管的入口伸過分流進(jìn)樣器的分流出口，這樣才會得到尖銳的峰形,。對于分流/不分流進(jìn)樣,，毛細(xì)管的入口應(yīng)接到進(jìn)樣器的底部，這樣可以使汽化管中的樣品*進(jìn)入柱子,，也不會出現(xiàn)氣流清洗不到的“死區(qū)”,。
　　　　　　　　毛細(xì)管柱與進(jìn)樣器的連接示意圖
    1.2毛細(xì)管柱與檢測器的連接在毛細(xì)管連接到檢測器之前，先接通載氣,，看一下柱子的出口是否有載氣通過,，（將柱子出口浸入清水中看是否有氣泡出現(xiàn)）如果沒有載氣從柱子出來，說明柱前的系統(tǒng)中有的地方漏氣或柱子堵塞，應(yīng)找出原因加以解決,。然后將柱子的未端盡可能的伸到檢測器（FID）的噴嘴以下的1~2厘米處（但不能超過噴嘴如圖2 ,，并使柱子的出口處于氣流的zui高流速區(qū)域（即氫氣引入口以上），如果柱子不能直接伸到檢測器的噴嘴下1~2厘米處,，但必須伸到尾吹氣入口的上部使柱子的未端處于氣流的高速區(qū)域,。圖2 毛細(xì)管柱與檢測器的連接示意圖
1.3分流比的測定與選擇
    分流比可以定義：樣品*汽化時與載氣充分混合后，樣品通過分流進(jìn)樣器進(jìn)入柱子的流量FC與通過分流器的流量F分流之比：
　　分流比= FC/F分流　　 （式1）
有的人把分流比定義為：樣品進(jìn)入汽化室后,，進(jìn)樣器中總的流速=FC十F 分流與柱流速FC之比： 
　　分流比=FC/（FC +F分流）　　 （式2）
    例如,，柱子出口流 速為1ml/分，分流器放空的流速為99ml／分,，則分流比為100:1 ,，因為柱流速FC比分流流速小得多，所以(式1),、（式2）的結(jié)果很相近,，F(xiàn)C和F 分流可通過皂沫流量計測量。如果載氣通過毛細(xì)管柱的流量很小,，用皂沫流量計不容易測量,，F(xiàn)C也可以通過計算求出：
　　　　FC= 60uπr2 
    其中u為載氣的平均線速度，單位厘米／秒,。u可以通過進(jìn)樣后用某物質(zhì)的保留時間求得,，某物質(zhì)可以用甲烷、甲醇等均可,，要求是色譜柱對該物質(zhì)的吸附要小,，一般以甲烷為宜，
具體計算方法為：
　　　　 u=柱長（厘米）/保留時間（秒）

分流比及分流有大小靠分流閥進(jìn)行調(diào)節(jié),，選擇適當(dāng)?shù)姆至鞅纫埠苤匾?。如果分流比很小，樣品大多?shù)進(jìn)入柱子,、容易

使峰變寬,，形成前伸峰。分流比一般選擇在1:100~200之間,，這時樣品的起始組分的譜帶擴展很小,，出峰尖銳。對一根0.25mm內(nèi)徑的毛細(xì)管柱,，
   用N2作載氣,，*流速0.3~0.4ml/分，則分流流量調(diào)到50ml/分左右即可,。在毛細(xì)管分流進(jìn)樣系統(tǒng)中一般以柱頭

壓力來恒量柱流量的大小,，下表給出一些常用的毛細(xì)管柱在標(biāo)準(zhǔn)線速度的情況下的柱頭壓力：
　　　　柱內(nèi)徑
柱長度　　
       0.2mm　 　0.25mm　　  0.32mm　     　0.53mm
15m　　0.06Mpa　　0.039Mpa　　0.024Mpa　　0.009Mpa
25m　　0.1Mpa　　0.065Mpa　　0.04Mpa　　0.016Mpa
30m　　0.13Mpa　　0.08Mpa　　0.048Mpa　　0.019Mpa
50m　　0.22Mpa　　0.14Mpa　　0.08Mpa　　0.032Mpa

上表所使用的載氣為氮氣，線速度為20cm/秒?；驓錃?，線速度為40cm/秒。
1.4尾吹氣流量的測量與選擇
    毛細(xì)管色譜分析用FID檢測器時,，一定要加尾吹氣,，一般用空氣或N2氣。加尾吹氣的作用之一是減少柱后死體積對色譜峰造成的擴散,，之二是保證FID有合適的氮氫比。FID系質(zhì)量型檢測器,，適當(dāng)?shù)卦黾游泊禋饪商岣邫z測的靈敏度,，但尾吹氣太高，會引起基線不穩(wěn)以至滅火,，

尾吹氣流速對峰高的影響
     尾吹氣太低,，會引起色譜峰拖尾、對毛細(xì)管柱效損失大大,。尾吹氣流量一般在20-30ml比較適合,，可用皂沫流量計來測量。
1.5 毛細(xì)管柱的老化
     涂漬好的毛細(xì)管柱首先要經(jīng)過充分的老化,，以除去固定液中的低分子量物質(zhì),，一般商品毛細(xì)管柱，在制造出廠前都已經(jīng)過充分老化,；但柱子一經(jīng)從儀器上拆卸下來,，較長時間接觸空氣，在下一次使用之前,，以較低的初始溫度程序升溫至zui高使用溫度老化2—3次,。各種固定液因其性質(zhì)和生產(chǎn)廠家不同而zui高使用溫度有所不同，所以要注意毛細(xì)管柱的說明,，生產(chǎn)毛細(xì)管柱的廠家應(yīng)注明zui高使用溫度,。老化中應(yīng)注意載氣的流速不易過大，否則會破壞均勻的液膜,。一般非極性柱在250℃以下老化使用,，可用普通氮氣，在250℃以上高溫使用時,，必須使用高純氮氣或普通氮氣經(jīng)脫氧后使用,，以延長柱子的使用壽命。對極性柱,，尤其是PEG類（聚乙二醇）,、FFAP、含氰基的固定液（OV225、•OV275）,，一定要用高純氮氣（高純氮氣經(jīng)過脫氧,，）99.99%否則，固定液很快被氧化,，以致不能使用,。
1.6交聯(lián)毛細(xì)管柱的清洗

交聯(lián)毛細(xì)管柱zui重要的優(yōu)點是當(dāng)柱被可溶性有機重組分污時，可以用溶劑清洗除去污染物,，使柱得以再生,，根據(jù)污染的性質(zhì)，可適用非極性溶劑（如正戊烷）或極性浴劑（如二氯甲烷,、丙酮,、苯等）。每個試驗室都可以做一簡單設(shè)備,，如（圖4）來進(jìn)行清洗,。
     清洗方法：將溶劑裝入小瓶的2/3處，把毛細(xì)管的出口端（接檢測器的一端）刺過青霉素的橡皮蓋插入溶劑底部,。（青霉橡皮蓋較硬,，不易被彈性石英毛細(xì)管刺透，可用一金屬絲或注射針預(yù)先刺透,，在留的痕跡處插入石英毛細(xì)管）,。接著用25ml或50ml的注射針，向小瓶內(nèi)壓入空氣,，溶液即會壓入柱內(nèi),，直全部溶劑從柱中流出，（如果是20米以上的大口徑毛細(xì)管柱,，再加一次溶劑清洗) 隨后,，將柱從小瓶中拉出與儀器的進(jìn)樣連接，用載氣將柱中的溶劑吹干后,，再把柱的另一端與檢測連接,。用程序升溫的方式老化l～2次，即可使用,。
清洗過程應(yīng)注意：

① 溶劑必須用分析純試劑,；②溶劑在柱浸泡時間不能過長，以防止固定液液膜溶漲,，使柱效下降,。

圖4清洗方法示意圖
1．25或50ml注射器　　2．青霉素小瓶　　3．毛細(xì)管柱
1.7毛細(xì)管色譜分析中常見故障及排除
1.7.1進(jìn)樣不出峰
　　這是zui常見的問題之一，主要原因有以下凡個方面：
　　漏氣：進(jìn)樣隔墊,、柱子兩端的接頭以及放空針形閥前的連接處漏氣,?；鹧嫦纾赫{(diào)節(jié)氫氣或尾吹氣流量的大小，看記錄筆是否向一邊偏移,，如筆不動,，說明火熄了或火沒點著。

電路不正常：離子線,、放大器,、記錄儀連線接錯或接觸不好，放大器有問題,。
系統(tǒng)堵塞：在上述情況均正常時應(yīng)懷疑系統(tǒng)堵塞,，樣品沒有進(jìn)到檢測器，先檢查柱后是否有氣流通過,，如果沒有氣流通過,，可能柱子堵塞，從柱后折斷1~2厘米,，仍不通氣，再檢查柱前是否堵塞,，在確認(rèn)柱子通氣的情況下,，檢查柱子到檢測器的連接管路是否堵塞。尾吹氣沒加上：調(diào)節(jié)尾吹流量,，如果記錄筆不動（在保證火點著和儀器正常情況下）,，應(yīng)懷疑流量不夠。關(guān)掉氫氣和空氣,，噴嘴口若沒有氣流,，證明是氣路堵塞或尾吹管路堵塞。
靈敏度太低,；可能高壓沒加上,，絕緣不好等儀器本身的問題，也有操作上的原因,，高阻太低,，衰減大大，記錄儀滿刻度毫伏數(shù)大大等,。毛細(xì)管色譜常用10 ~10 歐姆的高阻,，衰減盡可能小，記錄儀滿刻度1毫伏（噪音可允許的情況下）,。如果記錄儀滿刻度只有5毫伏或10毫伏,，衰減可相應(yīng)小一些或高阻高一擋。
另外,，柱子從中間斷開,。樣品濃度大低,、放空流量太大。注射針堵塞等原因都可能造成不出峰,。
1.7.2色譜峰拖尾,， 
　　拖尾峰引起的原因比較復(fù)雜，毛細(xì)管柱和儀器系統(tǒng)都可能引起拖尾,。柱子兩端安裝不正確,，沒有超過分流點和尾吹點；或者是安裝好后又在接頭處斷裂,；柱外死體積較大,；尾吹氣流量小，樣品在柱內(nèi)或者系統(tǒng)內(nèi)壁非線性吸附,；汽化室污染,，此時應(yīng)檢查柱子的連接是否正確，有無斷裂,，尾吹氣流量是否合適,，強極性組份在金屬、載體,、固定液和載氣以及固定液和玻璃界面上都會發(fā)生吸附作用,，這些表面吸附作用可以通過表面純化來解決。是將系統(tǒng)全玻璃化,，并使用石英毛細(xì)管柱,，或?qū)悠愤m當(dāng)?shù)剞D(zhuǎn)化。

圖5拖尾峰和前伸峰
前伸峰是由于進(jìn)樣量太大,，柱子超負(fù)荷,，進(jìn)樣器或柱溫太低引起的、只要提高儀器的靈敏度,，減小進(jìn)樣量,，提高進(jìn)樣器溫度或柱溫，就能或少解決色譜峰的前伸問題,。

                                                                        泰興市艾譜化工設(shè)備有限公司技術(shù)部