首先,,感謝您選擇性能*的 Thermo 色譜柱產(chǎn)品,。
為了使您的色譜柱能發(fā)揮zui大的性能,,敬請先閱讀以下說明:
1,、 適用鍵合相
反相色譜柱鍵合相包括:C18,、C8,、C4、C1,、Phenyl,、PFP、aQ,、Cyano1等,。
2、 柱體積
色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算:
V = 0.68πr2L
V 為色譜柱柱體積(mL),,r 為色譜柱內(nèi)徑(cm),,L 為色譜柱的長度(cm)。
3,、 色譜柱柱效測試與保存
反相色譜柱出廠時都經(jīng)過柱效測試,,所用化合物為茶堿、鄰-硝基苯胺、苯甲酸甲酯和二甲苯,,如有不同,,以柱效報告為準(zhǔn)。
在條件允許情況下,,請對新色譜柱進(jìn)行柱效測試,。
反相色譜柱出廠時均保存在乙腈-水溶液中。
4,、 溫度
所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于 60℃,。
5、 樣品
將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中,。如果使用梯度洗脫,,則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。
樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,,使用 0.5μm 或更小粒徑的濾膜過濾,。同時建議在色譜系統(tǒng)中使用在線過濾器。
樣品溶液如果使用強(qiáng)溶劑(例如,,流動相為水,,樣品溶劑為甲醇),為達(dá)到較好峰形,,需要降低進(jìn)樣量(以 250x4.6mm 規(guī)格為例,,小于 10μL)。
6,、 流動相
所有流動相,,特別是含有緩沖鹽的流動相,當(dāng)日實(shí)驗當(dāng)日配制,;如果使用了前日配制的流動相,,請確保流動相 pH 值沒有變化,并確保流動相沒有長菌,。
流動相的 pH 值取決于您的應(yīng)用和色譜柱填料類型,。我們建議在所有的色譜柱上都僅使用 pH 范圍為 2~8 的流動相(Hypercarb 可以使用 pH 為 1~14 的流動相);如果需要使用pH 更高(2~10)的流動相,,請選用 Hypersil GOLD,、Syncronis C18、Betasil C18 等色譜柱,并請盡量避免使用無機(jī)緩沖鹽,。
請盡量避免在常規(guī)流動相中使用很高比例的水(>95%)作為流動相,,此類流動相僅適用于中等疏水的鍵合相,例如 Hypersil GOLD aQ,、Aquasil C18,、Syncronis aQ 等色譜柱,。
所有流動相都需使用 2μm 濾膜過濾。
7,、 色譜柱安裝
請小心操作色譜柱,。
不要摔、碰色譜柱,,這樣會損壞色譜柱床,,使色譜柱性能下降。
使用合適的連接管路和接頭,,確保色譜柱連接處死體積降到zui低(使用不銹鋼接頭時需要尤其注意),。我們建議使用SLIPFREE 接頭,此接頭與Thermo色譜柱以及其他品牌色譜柱均匹配,。
8,、 色譜柱平衡
在進(jìn)行分析之前,請使用至少 20 倍柱體積的流動相沖洗色譜柱,,以使色譜柱達(dá)到平衡,。
9、 色譜柱保護(hù)
對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品,,請盡量使用在線濾器或保護(hù)柱,,如果可能,使用 SPE 小柱對樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇,。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命,。
10、 色譜柱清洗
常規(guī)清洗:
在儲存色譜柱之前,,請使用至少 20 倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱(去除緩沖鹽),,再用更強(qiáng)的溶劑沖洗色譜柱(去除強(qiáng)保留成分,,反相色譜通常使用甲醇或乙腈),,然后使用合適的溶劑儲存色譜柱。
清洗強(qiáng)保留污染物:
使用如下試劑依次清洗色譜柱
20 倍柱體積不帶緩沖鹽的流動相,;
20 倍柱體積甲醇或乙腈,;
20 倍柱體積異丙醇;
20 倍柱體積正己烷或氯仿,;
20 倍柱體積異丙醇,;
20 倍柱體積甲醇或乙腈。
11,、 色譜柱保存
反相色譜柱,,保存溶劑通常是含至少 30% 有機(jī)相的水溶液,也可在常規(guī)清洗后直接保存在有機(jī)相中,。
如果需要長時間儲藏,,則需要使用較高比例的有機(jī)相(有機(jī)相比例至少大于 50%,,但不建議使用純有機(jī)相)。
注意:如果違反上述規(guī)程,,可能使色譜柱失去保修,。
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