1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜂蠟中二十八烷醇,、三十烷醇含量的測定方法,。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜂蠟中二十八烷醇,、三十烷醇含量的測定。
本標(biāo)準(zhǔn)檢出限：二十八烷醇的檢出限為0.1% ,，三十烷醇的檢出限為0.16%,。
2 規(guī)范性引用文件
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GB/T 6379.1 測定方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度）第1部分: 總則與定義
GB/T 6379.2 測定方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度與精密度）第2部分: 確定標(biāo)準(zhǔn)測定方法重復(fù)性與 再現(xiàn)性的基本方法 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3 原理
試樣經(jīng)回流水解后,，用氯仿提取樣品中的二十八烷醇、三十烷醇,，提取液經(jīng)無水硫酸鈉凈化,，濾膜 過濾后，氣相色譜火焰離子化檢測器檢測,，外標(biāo)法定量,。
4 試劑
除非另有說明，均使用分析純試劑,，水為GB/T6682規(guī)定的一級水,。
4.1 氫氧化鉀。
4.2 無水硫酸鈉,。
4.3 氯仿,。
4.4 95%乙醇。
4.5 0.5 mol/L 的氫氧化鉀乙醇溶液,；稱取 2.8 g 氫氧化鉀,，用 100mL 95%乙醇溶解于塑料瓶中，常溫 密封保存,。
4.6 二十八烷醇,、三十烷醇標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98%。
4.7 二十八烷醇,、三十烷醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別稱取 50 mg 二十八烷醇,、三十烷醇標(biāo)準(zhǔn)品，至 0.1 mg,， 放入同一 100 mL 容量瓶中,，加氯仿超聲波溶解后定容。常溫密封環(huán)境下,，有效期三個月,。
4.8 二十八烷醇、三十烷醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.7）0.2 mL,，1.0 mL,，2.0 mL,， 5.0 mL，10.0 mL 于 10 mL 容量瓶,，用氯仿配制成 10.0 mg/L,，50.0 mg/L，100.0 mg/L,，250.0 mg/L，500.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,。常溫密封環(huán)境下,，有效期一個月。
5 儀器設(shè)備
5.1 氣相色譜儀：配有火焰離子化檢測器（FID）,。
5.2 超低溫冰箱（-86℃）,。
5.3 高速粉碎研磨儀。
5.4 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.001 g,。
5.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,。
5.6 回流裝置。
5.7 超聲波,。
6 試樣制備與保存
6.1 試樣的制備 取樣品 200 g 置于超低溫冰箱中,，1h 后取出，用粉碎機(jī)研磨成粉狀,，置于樣品瓶中,，密封標(biāo)記。
6.2 試樣的保存 將試樣于-18 ℃保存,。
7 測定步驟
7.1 提取
稱取均勻的試樣 0.25 g,，至 0.001 g，置于 150 mL 三角瓶中,，加入 20 mL 氫氧化鉀溶液（4.5）,， 水浴 90 ℃ 回流 2 h， 60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇后,，加入 50 mL 氯仿溶解殘渣,，并將溶液全部轉(zhuǎn)移至透 明玻璃離心管中，加入 30 mL 水,，漩渦振蕩 1 min,，靜置，除去上層液體,，再重復(fù)用 30 mL 水清洗兩次 后,，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至 100 mL 容量瓶中，并用氯仿定容,。測定前,，取適量溶液經(jīng)無水硫酸鈉干燥,，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾，待氣相色譜測定,。超過線性范圍的樣品,，需要稀釋后重新測定。
7.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液于進(jìn)樣瓶中,，氣相色譜儀測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的響應(yīng)值（峰面積）,，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面 積為縱坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
7.3 氣相色譜條件
色譜柱：（5%-苯基)-甲基聚硅氧烷 30 m × 0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25 μm 或相當(dāng)者； 柱溫：200 ℃保持 1 min,，以 5 ℃/min 的速率升溫到 320 ℃,，保持 10 min； 進(jìn)樣口溫度：320 ℃,； 檢測器溫度：340 ℃,； 載氣：氮氣（N2），純度≥99.99%,； 燃?xì)猓簹錃猓℉2）,，純度≥99.99%； 柱流速：1.0 mL/min,； 氫氣流速：30 mL/min,； 空氣流速：300 mL/min； 不分流進(jìn)樣：2 μL,。
7.4 氣相色譜測定
取適量試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,，作單點或多點校準(zhǔn)，以試樣峰與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰相對保留時間 定性,，以色譜峰面積值定量,。標(biāo)準(zhǔn)工作液及試樣液中的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)溶 液和試樣溶液的氣相色譜圖見附錄 A,。
8 結(jié)果計算
試樣中二十八烷醇,、三十烷醇的含量按式（1）計算：

式中：
x―試樣中二十八烷醇、三十烷醇質(zhì)量百分比含量,，%,；
c―從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得到的被測組分的濃度，單位為毫克每升（mg/L）,；
v―試樣溶液定容體積,，單位為升（L）；
m―試樣的質(zhì)量,，單位為克（g）,。
測定結(jié)果取其兩次測定的算術(shù)平均值,，計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
9 精密度
9.1 重復(fù)性
在重復(fù)性條件下,，獲得的兩次獨立測試結(jié)果差值不得超過重復(fù)性 r,。r= 2.8× Sr（重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差）。

9.2 再現(xiàn)性
在再現(xiàn)性條件下,，獲得的兩次獨立測定結(jié)果,，差值不得超過再現(xiàn)性 R。R= 2.8×SR（再現(xiàn)性標(biāo) 準(zhǔn)差）,。

二十八烷醇  重復(fù)性限 r 0.40 再現(xiàn)性 R 0.42
三十烷醇     重復(fù)性限 r 0.52  再現(xiàn)性 R 0.53

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