ELISA試劑盒,,即酶聯免疫法,。ELISA法具有靈敏度高,、特異性強,、重復性好的特點,,并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點,,因而多年來廣泛應用于各高校,、醫(yī)院、血站和科研機構的實驗室中,。
影響ELISA實驗的因素
我們技術人員通過幾年的實驗觀察,,認為影響ELISA實驗的因素有如下三方面:
一、試劑盒
1,、抗原,、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活,結果不易判斷,。再有ELISA試劑盒靈敏度高,,對雜質的反應靈敏度也高,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性,;
2,、酶結合物濃度過高,也會導致OD值假性增高,。
二,、試驗儀器
1、加樣器是否經過校正,,酶免測定血清用血量很少,,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,,會使結果忽高忽低,;
2、每次洗板前,,應檢查洗板機針孔有無堵塞,。
三、操作
1,、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗結果假性降低,;
2,、加樣時注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性,;3,、洗滌不充分,,會使結果假性增高,過分洗滌呈假陰性,;
4,、比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽,,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時,,底部留有水汽,應將板底擦干后進行比色,,水汽或孔內氣泡也會使OD值升高,;
5、抗原與抗體反應達到*平衡,,依賴于溫度與時間,。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,,影響反應速度,。
總之,由于ELISA試劑盒實驗的影響因素較多,,在實際工作中必須操作規(guī)范,、仔細,避免和排除各種因素的影響,,使之得到準確可靠的檢驗結果,。
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