小鼠去甲腎上腺素（NA）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

　　本試劑盒僅供研究使用。

　　【檢測(cè)范圍】96T

　　3pg/ml-120pg/ml

　　【使用目的】

　　本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中去甲腎上腺素（NA）含量,。

　　【實(shí)驗(yàn)原理】

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠去甲腎上腺素（NA）水平。用純化的小鼠去甲腎上腺素（NA）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入去甲腎上腺素（NA），再與HRP標(biāo)記的去甲腎上腺素（NA）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的去甲腎上腺素（NA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠去甲腎上腺素（NA）濃度,。

　　試劑盒組成

1     30倍濃縮洗滌液   20ml×1瓶    7   終止液      　    6ml×1瓶

2     酶標(biāo)試劑         6ml×1瓶     8   標(biāo)準(zhǔn)品（240pg/ml）0.5ml×1瓶

3     酶標(biāo)包被板       12孔×8條    9   標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液   　 1.5ml×1瓶

4     樣品稀釋液       6ml×1瓶　   10  說明書　          1份

5     顯色劑A液　      6ml×1瓶     11  封板膜            2張

6　   顯色劑B液　      6ml×1/瓶　  12　密封袋            1個(gè)

【標(biāo)本要求】

　　1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

【操作步驟】

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

　　120pg/ml         5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品          150靗的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150靗標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　60pg/ml          4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品         150靗的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150靗標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　  30pg/ml         3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品           150靗的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150靗標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15pg/ml         2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品            150靗的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150靗標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    7.5pg/ml         1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品             150靗的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150靗標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50靗，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40靗,，然后再加待測(cè)樣品10靗（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50靗,，空白孔除外,。

　　7. 溫育：操作同3,。

　　8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50靗,，再加入顯色劑B50靗,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液50靗,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

　　11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

　　【操作程序總結(jié)】

　　計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　注意事項(xiàng)

　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

　　2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

　　3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

　　4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

　　5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

　　6．底物請(qǐng)避光保存,。

　　7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

　　9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

　　10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。

　　保存條件及有效期

　　1．試劑盒保存：,；2-8℃。

　　2．有效期：6個(gè)月