人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒技術步驟

本試劑盒僅供研究使用。

實驗原理

人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)水平,。用純化的人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1),，再與HRP標記的肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)濃度,。

人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（800ng/L）0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

400ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

200ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

100ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

50ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

25ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4.配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11.測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度,。

人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

人肉堿棕櫚酰轉移酶-Ⅰ(CPT1)ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月