日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網>技術中心>儀器文獻>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您,? 在線咨詢

熒光定量PCR常用術語

來源:上海嘉鵬   2016年03月11日 15:04  

基線:基線是早期循環(huán)的噪點水平,,通常在第3和第15循環(huán)之間測量,這是因為在此期間還檢測不到擴增產物引起的熒光值增加。用于計算基線的循環(huán)數(shù)量是可以改變的,,如果使用高模板量或者靶標基因的表達水平高則循環(huán)數(shù)量需要減少,。設置基線需要查看線性度擴增曲線的熒光數(shù)據,。設置基線,,使得擴增曲線的增長所開始的循環(huán)圈數(shù)大于基線循環(huán)zui高圈數(shù)。對每個靶標序列都需要單獨設置基線,。早期循環(huán)檢測到的平均熒光值需要從擴增產物中獲得的熒光值中減去,。各種real-timePCR軟件的版本允許單個樣品自動優(yōu)化基線設置。

本底:是指反應中的非特異性熒光值,,例如,,低效率的熒光淬滅,或由于使用SYBR Green造成的大量雙鏈DNA模板,。信號的本底分量由real-time PCR軟件算法數(shù)學除去,。

報告基因信號 :在real-time PCR過程中由SYBR Green或熒光標記的序列特異性探針產生的熒光信號。

歸一化報告信號(RN):這是報告染料熒光強度除以在每個循環(huán)中測量的被動參照染料的熒光強度,。

被動參比染料 :在某些real-time PCR中,,熒光染料ROX被用作熒光信號標準化內部參照。它可以逐孔校正因校正因移液不準確,、孔位置及熒光波動造成的變動,。

閾值:閾值調整到本底值之上并顯著低于擴增曲線的平穩(wěn)值。它必須處于擴增曲線的線性區(qū)域內,,代表了PCR檢出的對數(shù)線性范圍,。閾值應在對數(shù)擴增曲線視圖中進行設置,以使PCR的對數(shù)線性期易于識別,。如果real-time PCR中有多個目標基因,,閾值必須為每個目標進行設定。

循環(huán)閾值(CT)或交叉點(CP):擴增曲線穿過閾值的循環(huán)(即,,熒光檢測值顯著增加的點),。CT可以是一個分數(shù),并且可以計算起始模板量,。

ΔCT值: ΔCT值描述了靶標基因和相應的內參基因CT值的差值,,例如看家基因,,并用于標準化模板的使用量:

ΔCT = CT (靶標基因) – CT (內源性參比基因)
ΔΔCT值:ΔΔCT值描述了感興趣樣品(例如,刺激細胞)的平均ΔΔCT值與參考樣本(例如,,未刺激細胞)的平均ΔΔCT值之間的差值,。參照樣品也被稱為校準樣品,并且所有其它樣品進行相對定量時都將被標準化到如此:
ΔΔCT = 平均ΔCT (感興趣樣品) – 平均ΔCT (參比樣本)
內源性參比基因:e這種基因的表達水平在樣品間不存在差異,,例如看家基因(3),。對比內參基因與靶標基因的CT值可以將靶標基因的表達水平歸一化到輸入的RNA或cDNA的量(見上面關于ΔCT值部分)。反應中模板的確切數(shù)量不確定,。內參基因對以下情況作出校正:可能的RNA降解或RNA樣品中存在酶抑制劑的情況,以及RNA含量,、逆轉錄效率,、核酸回收和樣品處理的變動。為了選出*的參照基因(多個),,我們對算法進行了改進,,允許其選擇依賴于實驗設置*參照(4)。

內參:在同一反應中被作為靶序列擴增的,,并用不同的探針(即,,進行雙重PCR)檢測的對照序列。內參經常被用來排除失敗的擴增,,例如沒有檢測到目標序列的情況,。

標定樣品:在相對定量中使用的參比樣品(例如,源自細胞株或組織純化的RNA),,用以與所有其他樣品進行比較,,以確定某一基因的相對表達水平。標定樣品可以是任何樣品,,但通常是一個對照品(例如,,未處理的樣品或來自實驗零時的樣品)。

陽性對照:使用已知量模板的對照反應,。陽性對照通常用來檢查引物集或引物–探針集工作是否正常,,以及反應是否正確設置。

無模板對照(NTC):包含除模板之外的所有擴增反應所必要組分的對照反應,。這使得發(fā)現(xiàn)由于污染的試劑或外源DNA造成的污染成為可能,,例如從以前的PCR中。

無RT對照: RNA制備物可能含有殘留的基因組DNA,,如果檢測不被設計為僅檢測和擴增RNA序列,其可以在real-time RT-PCR中進行檢測,。DNA污染可以通過操作在其中沒有加入逆轉錄酶的RT對照反應來進行檢測。

標準品:已知濃度或拷貝數(shù),,用于構建標準曲線的樣品,。

標準曲線:要生成標準曲線,,CT值/不同標準稀釋的交叉點對標準物質輸入量的對數(shù)繪圖。標準曲線通常是使用至少5種不同濃度的標準稀釋倍比生成,。每個標準曲線,,應檢查其有效性,斜率值落在–3.3到–3.8之間,。標準是各濃度一式三份的理想測定值,。標準曲線的斜率如果與這些值差異較大則應該舍棄。
 

效率和斜率:標準曲線的斜率提供了對real-time PCR的效率指示,。斜率–3.322表示該PCR具有數(shù)值為1的效率,,或100%的效率,并且PCR產物的量在每個循環(huán)增加到兩倍,。效率小于–3.322(例如,,–3.8)則表示PCR的效率<1。通常,,大多數(shù)擴增反應因為實驗的限制不能達到100%的效率,。斜率大于–3.322(例如,–3.0)表明PCR效率似乎是大于100%的,。當在反應中的非線性期對值進行測量時可能發(fā)生這種情況,,或者它可以指示是否有抑制劑存在。

 上海嘉鵬科技有限公司專業(yè)生產:紫外分析儀,、三用紫外分析儀,、暗箱式紫外分析儀、暗箱三用紫外分析儀,、暗箱紫外分析儀,、手提式紫外分析儀、三用紫外分析儀暗箱式,、紫外檢測儀,、部分收集器、恒流泵,、蠕動泵,、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng),、化學發(fā)光成像分析系統(tǒng),、光化學反應儀、旋渦混合器,、漩渦混合器,、玻璃層析柱、梯度混合器、梯度混合儀,、核酸蛋白檢測儀,、玻璃層析柱、熒光增白劑測定儀,、餾分收集器,、切膠儀、藍光切膠儀,、層析系統(tǒng)等產品,。咨詢。

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經本網授權使用作品的,,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”,。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任,。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任,。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,,必須保留本網注明的作品第一來源,,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容,、版權等問題,,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利,。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618