DEAE-纖維素

1 簡介

   DEAE-纖維素，它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物,，表面又用大分子糖鏈接枝,，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，保持更高載量,，同時又具有更好的分辨率,。由于比表面積大，平衡和洗脫的時間也更短,。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒,，質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變,。

本產(chǎn)品物理和化學穩(wěn)定性好,，使用壽命長，操作方便,。

2 填料特征：

3 應(yīng)用的注意事項：

3.1 色譜柱裝填

（1）所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時裝柱即可,，如果不好溶脹,，可適當加熱。

（2）在柱子下端加入20%乙醇,，以除去柱子中的空氣,，關(guān)閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的20%乙醇,。20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡,，可以在里面加1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子,，但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水,，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進行，也可以小心傾去填料上的20%乙醇,，再換成5倍體積的純水,，反復(fù)沉淀去上清，5次左右就可以用于裝柱子,。

（3）此填料顆粒比較細,，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng)，不能漏,，也可以取點填料加到篩網(wǎng)上試試，如果沒有問題再將填料連續(xù)倒入柱子時,，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流,，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化,，而填料和上面的液體很好分層,，上層溶液*澄清，就可以開泵用適當?shù)牧魉賶褐?，填料體積不再變化后,，再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速,。

（4）在裝柱子前,，填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個小時，這樣避免裝柱子時由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡,。

3.2 蛋白的結(jié)合

樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致,，鹽濃度過高或者pH帶低也許掛不上，所以要根據(jù)自己的樣品做適當調(diào)整,。

3.3 蛋白的洗脫

這個填料如果采用線性梯度洗脫,，柱子的直徑和高度比是大于10，數(shù)值越大越有利于分離，而且樣品別上太多,，可以按約10mg/ml上樣,，如果采用階段洗脫的方法，裝短粗柱子就可以,，上樣量也沒有限制,。階段洗脫容易放大，重復(fù)性好,，如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好,。采用什么方法*根據(jù)自己需要。

4 再生清洗

（1）每次用完用0.1MNaOH含2M NaCl洗 5個床體積,，再用水洗5個柱床體積,，然后用20%乙醇保存，使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%異丙醇都含1%吐溫洗5個柱床體積,，zui后20%的乙醇流洗5個柱床體積,。

（2）有機溶劑和水混合很容易產(chǎn)生氣泡，為了避免這樣情況,，可以把配好的有機溶劑在室溫放置guo夜,，再使用，這樣可以避免氣泡進柱子而導致柱子不能正常使用,。

5 保存

在20%乙醇中,，4℃下長期保存。

特別注意：

上樣之前,，樣品必須去色素,，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用,。