ELISA試劑盒細胞凍存zui常用的技術是液氮冷凍保存法,,主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞,。具體的操作步驟如下:
(1)選擇處于對數(shù)生長期的細胞,在凍存前一天換液,。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)液去掉,,用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶,,加入少量新培養(yǎng)液,。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞,使其成為均勻分散的細胞懸液,。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理,。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min,10分鐘),。
(2)去上清液,,加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基,于4℃預冷15分鐘后,,逐滴加入已無菌的DMSO或甘油,,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,細胞濃度為3×106~1×107/mL之間,。
(3)ELISA試劑盒將上述細胞分裝于安瓿或冷凍塑料管中,,安瓿裝1~1.5mL在火焰噴燈上封口,封口處要*封閉,,圓滑無勾,。冷凍管要將蓋子蓋緊,并標記好細胞名稱和凍存日期,,同時作好登記(日期,、細胞種類及代次,、凍存支數(shù))。
(4)ELISA試劑盒將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi),;置于液氮容器頸口處存放,,次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟:先將安瓿置入4℃冰箱中2~3小時,,再移至冰箱冷凍室內(nèi)3~4小時(此步可省略),,再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時,zui后沉入液氮中,。
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