實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人重組人表皮生長因子（  rh-EGF）,。用純化的人重組人表皮生長因子（ rh-EGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入重組人表皮生長因子（    rh-EGF）,，再與  HRP  標(biāo)記的重組人表皮生長因子（rh-EGF）抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色,。TMB在  HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的重組人表皮生長因子（rh-EGF）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人重組人表皮生長因子（rh-EGF）活性濃度,。
人重組人表皮生長因子試劑盒使用說明書試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2酶標(biāo)試劑
標(biāo)準(zhǔn)品（320IU/L）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3酶標(biāo)包被板
4樣品稀釋液
5顯色劑 A液
6顯色劑 B液
10說明書
11封板膜
12密封袋
2張
1個
標(biāo)本要
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過
（HRP）活性,。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
160IU/L
80IU/L
40IU/L
20IU/L
10IU/L
5號標(biāo)準(zhǔn)品
4號標(biāo)準(zhǔn)品
3號標(biāo)準(zhǔn)品
2號標(biāo)準(zhǔn)品
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  5號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  4號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  3號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150µl的  2號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

溫育：用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘,。
30倍稀釋后備用
配液：將 30倍濃
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜
重復(fù) 5次,，拍干,。
30秒后棄去，如此
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外,。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5,。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總：
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上
,，根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有
析出,，稀釋時可在浴中加溫助溶,，洗滌時不影響。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗,。
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6個月