1. 種屬來源要匹配:根據(jù)所用一抗選定二抗,。一般來說,,如果一抗是小鼠原性,,二抗應(yīng)選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體,。目前,,美國Vector公司和Zymed公司都有開發(fā)的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒,,即一抗來源于小鼠,,該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內(nèi)源性小鼠Ig的封閉液,,可以得到清晰的染色背景,。
2. 注意抗體同種型和亞型:確定一抗同種型和亞型后,可以選擇抗一抗來源種屬廣譜Ig或針對一抗亞型的二抗,。如一抗是小鼠IgG1, 可以選用山羊抗小鼠的Ig或IgG1的二抗,。
3. 正確使用:也需要重新選擇稀釋比例。一般從供應(yīng)商提供稀釋比例的1/10稀釋度始,,作5倍比稀釋,。
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