一,、操作步驟

1)．過(guò)濾流動(dòng)相,，根據(jù)需要選擇不同的濾膜,。

2)．對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘,。

3)．打開(kāi)HPLC工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀),，連接好流動(dòng)相管道,，連接檢測(cè)系統(tǒng)。

4)．進(jìn)入HPLC控制界面主菜單,，點(diǎn)擊manual,，進(jìn)入手動(dòng)菜單。

5)．有一段時(shí)間沒(méi)用,，或者換了新的流動(dòng)相,，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵,，直接在泵的出水口,，用針頭抽取,。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下,，先點(diǎn)擊purge,，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過(guò)10ml/min,。

6)．調(diào)節(jié)流量,，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力,，流速越大,，壓力越大，一般不要超過(guò)2000,。點(diǎn)擊injure,，選用合適的流速，點(diǎn)擊on,，走基線,，觀察基線的情況。

7)．設(shè)計(jì)走樣方法,。點(diǎn)擊file,，選取selectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法,。若需建立一個(gè)新的方法,，點(diǎn)擊newmethod。選取需要的配件,，包括進(jìn)樣閥,，泵，檢測(cè)器等,，根據(jù)需要而不同,。選完后，點(diǎn)擊protocol,。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,，一般2-5分鐘；b.基線歸零,；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換,；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同,。

8)．進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作,。選定走樣方法，點(diǎn)擊start,。進(jìn)樣,，所有的樣品均需過(guò)濾,。方法走完后，點(diǎn)擊postrun,，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等,。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線,，洗掉剩余物,。

9)．關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī),，再關(guān)液相色譜,。

10)．填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字,。

二,、注意事項(xiàng)

1)．流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水,。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡,。

2)．柱子是非常脆弱的，*次做的方法,，先不要讓液體過(guò)柱子,。

3)．所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。

4)．壓力不能太大,，不要超過(guò)2000psi,。