在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液,。那么,，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中,，若加入HEPES,，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右,。 HEPES分子量為238.31,，分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2,，用在生化診斷試劑盒,、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

HEPES使用方法有兩種：

 (1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,，再過濾除菌,。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2,，濾過除菌后使用,。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。

(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L),，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液,，zui終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中,，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0,，然后用水定容至100ml，過濾除菌,，分裝小瓶(2ml/瓶),，4℃或-20℃保存。

需要注意的是,，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞無毒性作用,。一般情況下,，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。現(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶,，大家根據(jù)實際情況正確靈活配制就OK了,。