實驗材料    雜交瘤細胞
試劑,、試劑盒    *DMEM-10HEPES丙酮酸鈉PBS
儀器,、耗材    注射針頭離心管轉子離心機
實驗步驟    
1.  用20G或22G的注射針，小鼠腹膜內(nèi)注射降植烷,，每只鼠0.5 ~ 1 ml,，1周后接種細胞,。
 
2.  在175 cm2培養(yǎng)瓶中加*DMEM-10/HEPES/丙酮酸鈉培養(yǎng)液，進行雜交瘤細胞的培養(yǎng),，使細胞生長至對數(shù)期。
 
3.  將培養(yǎng)液轉入50 ml 錐形離心管中,，室溫下500 g 離心5 min,。
 
4.  細胞重懸于50 ml 無菌的PBS或HBSS（不含F(xiàn)BS）中洗滌。然后室溫下500 g 離心5 min,，棄上清。重復2次,，然后細胞重懸于5 ml 的PBS或HBSS中,。
 
5.   計數(shù)細胞，通過臺盼藍染色法確定細胞活力,。
 
6.  用不含F(xiàn)BS的HBSS或PBS調(diào)整細胞濃度至2.5×102細胞/ml,。
 
7.  用一個10 ml 的無菌的帶22G針頭的注射器，對裸鼠進行腹膜內(nèi)注射2 ml 細胞,，等待腹水形成（1~2周）,。
 
8.  收獲腹水。

（1）一只手抓住并固定小鼠,，使其腹部皮膚繃緊,。

（2）另一只手將一只18G的計頭插入小鼠腹腔1~2 cm 深。

（3）進針部位為左下腹或右下腹,，以避免刺入鼠上腹部的重要器官,，以及腹中線處的主要大血管。

（4）令腹水滴入一只無菌的15 ml 聚丙烯錐形離心管中,。
 
9.  于室溫下,，1 500 g 離心腹水10 min，收集上清,，棄沉淀,，將腹水存放于4℃，直到收集腹水的工作完成（在1周內(nèi)）,。
 
10.  再次收獲腹水前,，讓小鼠再次積累腹水（2~3天），具體操作同步驟8,，腹水的加工處理操作同步驟9,。重復這個過程直到再沒有腹水產(chǎn)生可供收集，或者小鼠健康狀況不佳。此時,，可處死小鼠

11.  把在幾天內(nèi)收集到的腹水匯集到一起,，于56℃水浴45 min 進行熱處理，如果凝塊形成,，可參照步驟9中方法去除之,，然后再離心。

12.  采用適當?shù)姆椒z測腹水中的MAb的滴度,。
 
13.  按大于1：10的比例稀釋MAb,，并進行濾過除菌，濾膜孔徑為0.45 μm,，分裝并凍存于-70℃,，避免反復凍融，可凍存數(shù)年之久,。