通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清,、血漿,、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的*步,，下面簡(jiǎn)單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。

1,、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本,，處理也比較簡(jiǎn)單。

用無熱原,、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃一個(gè)晚上，使血清析出,。（將試管或離心管傾斜放置,，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出,。）4℃ 1000×g離心20分鐘,，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融。

采血過程中應(yīng)避免溶血,，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性,。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染,，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽性。

2,、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿,。將上清分裝多份,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本,。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,，檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書,，檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。

3,、  細(xì)胞培養(yǎng)上清

取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),，取上清,，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融。

4,、  細(xì)胞裂解液

1）  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來,。懸浮細(xì)胞可省略,。

2）  收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基,，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3）  加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸,。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品,，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解,。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,，以達(dá)到裂解的目的。

5）  4℃ 10000×g 離心10min,，除去細(xì)胞碎片,，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。

5、組織勻漿液

1）  將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì),。

2）  將組織塊稱重，記錄后剪碎,，碎塊應(yīng)盡量小,，便于勻漿得更充分

3）  將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中,。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿,，例如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，檢測(cè)后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）

4）  吸取勻漿液到離心管,，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清,，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融。

6,、  尿液,、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min，取上清即可檢測(cè),。

總的來說,，因?yàn)?span style="font-family:times new roman,serif">ELISA只能檢測(cè)可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除,。

為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測(cè),；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。

另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN₃,，因?yàn)?span style="font-family:times new roman,serif">NaN₃會(huì)抑制HRP的活性,，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。