1、網(wǎng)上對柱子是否可以反沖一直有爭論,，那什么樣的柱子可以反沖,，什么不可以。反沖后是正者用,，還是反著用,。具體到各型號柱子不僅是ODS柱，其他如正向柱,、氨基柱,、離子交換柱等都有解釋。
答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖,，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,，反沖后還是正著用比較好,，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用,，反向沖洗,。

2、我在做方法開發(fā)的時候,用乙腈和水作為流動相,在調(diào)整梯度的時候發(fā)現(xiàn),剛開始用60%乙腈, RT為2.5分鐘,調(diào)到40%乙腈,RT沒有變化,30%也沒有變化,一直調(diào)到20%的時候,RT突然變到了約13分鐘,請問這是什么原因?我用的是離子交換柱. 
答：離子交換柱的保留時間主要由洗脫液的離子強度和pH決定,，你現(xiàn)在講的比較簡單,，需要把你的方法說的詳細一點才能做具體的分析。譬如分析物是什么情況,，其含有極性電離基團和非極性基團是什么性質(zhì),？離子交換柱是聚合物基質(zhì)還是硅膠基質(zhì)？水相是什么緩沖鹽,？

3,、對于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進行活化及維護,？為什么要這樣做,？
答：新柱活化,，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外,，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡,，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要,。因為分子量高的物質(zhì)分子,，擴散速度慢，平衡所需時間也相應(yīng)較長,。具體平衡方式也很簡單,，多進幾次樣品，直到峰面積和保留時間穩(wěn)定,，再進行正式進樣測定,。
如果要加快平衡時間，把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大,，或者不等洗脫完成,，連續(xù)進樣多針。用待測物對新柱平衡,，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉,。

4、測定多肽,，一般采用什么柱子,？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA,。特別是像類似三肽的短肽,，應(yīng)該怎么選擇柱子？
答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定,，也有用離子交換柱,、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

5,、氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子,，如使用一段時間后,，柱效降低，峰形改變,，如何恢復,？
答：氨基柱測酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式,。酸的存在可能會使略帶負電荷的氨基官能團質(zhì)子化,，導致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱（沖洗后當然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％,。

6,、色譜柱的技術(shù)都有哪些？比如封尾等,，這些技術(shù)在應(yīng)用時都體現(xiàn)在哪里,？
答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言,，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響,。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單，不同固定相,、不同粒徑,、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同,，要裝出緊密,、穩(wěn)定、均一的柱床,，更多是一門藝術(shù),，需要經(jīng)驗積累。
國內(nèi)和國外想比,，我認為色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會自己開發(fā)填料,，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里,。另外因為裝柱歷史短,，經(jīng)驗積累少，裝柱工藝也沒有*達到國外水平,。另外,，對色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國產(chǎn)的還不過關(guān),，在純度,、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比，差距很大,。

7,、色譜柱技術(shù)的差距在哪里,？
答：液相色譜柱裝填實際上是有一定技巧和程序,，可能還有一些運氣。一般使用高壓勻漿方法裝填,。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮,。然后用瞬間高壓壓實,，這實際上用到了不同比例的勻漿液體，和合適的壓力,。壓力太大,，顆粒破碎，壓力太小,，塔板數(shù)少,。同時壓力需要穩(wěn)定，不然分布不均,，拖尾嚴重,。同時還有頭上平整程度。套上套,，就可以用了,。

8、柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢,？原來也討論過這個問題,，我也拆下來清洗過，但我看到柱前段的污染更甚,，于是就用刀片刮了刮,，然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了,，但使用壽命會不會減少呢,？
答：柱頭污染了，就取出污染的,，再裝一些填料,。因為加入你刮了些填料，那么微觀的塔板數(shù)就少了,。假入你刮得不多,，僅表面，可能就是一些臟物,，所以,，問題解決。但是今后還會有同樣問題,，再掛,，那么不小心刮，影響柱效,。建議還是裝一個預柱。

9,、如果柱子取下來放置一段時間,，需要做什么保護嗎,？
答：對一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中,，然后用堵頭塞緊柱兩頭,，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做特殊的保護,。

10,、流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什么？
答：《液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說：甲醇為質(zhì)子給予體,、乙腈為質(zhì)子接受體,、四氫呋喃是偶極溶劑，應(yīng)該除了極性影響,，還有另外的影響因素,，至于分離機理，還是比較復雜的,，不能看成是個方法,。

（出處：源于月旭工程師解答，由網(wǎng)絡(luò)論壇剪切,，僅供參考）