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常用柱子問題解答

來源:天津市景隆元科技發(fā)展有限公司   2015年08月18日 16:09  

1,、網(wǎng)上對柱子是否可以反沖一直有爭論,,那什么樣的柱子可以反沖,什么不可以,。反沖后是正者用,,還是反著用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱,,其他如正向柱,、氨基柱、離子交換柱等都有解釋,。
答:一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,,只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖,不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,,反沖后還是正著用比較好,,以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是:正向使用,,反向沖洗,。

2、我在做方法開發(fā)的時候,用乙腈和水作為流動相,在調(diào)整梯度的時候發(fā)現(xiàn),剛開始用60%乙腈, RT2.5分鐘,調(diào)到40%乙腈,RT沒有變化,30%也沒有變化,一直調(diào)到20%的時候,RT突然變到了約13分鐘,請問這是什么原因?我用的是離子交換柱
答:離子交換柱的保留時間主要由洗脫液的離子強(qiáng)度和pH決定,,你現(xiàn)在講的比較簡單,,需要把你的方法說的詳細(xì)一點(diǎn)才能做具體的分析。譬如分析物是什么情況,,其含有極性電離基團(tuán)和非極性基團(tuán)是什么性質(zhì),?離子交換柱是聚合物基質(zhì)還是硅膠基質(zhì)?水相是什么緩沖鹽,?

3,、對于一根常用的c18柱,拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù),?為什么要這樣做,?
答:新柱活化,實(shí)際上是一個平衡的過程,,除了用流動相平衡外,,有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡,特別是測定分子量比較高的多肽,,尤其重要,。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子,擴(kuò)散速度慢,,平衡所需時間也相應(yīng)較長,。具體平衡方式也很簡單,多進(jìn)幾次樣品,,直到峰面積和保留時間穩(wěn)定,,再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。
如果要加快平衡時間,,把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,,或者不等洗脫完成,連續(xù)進(jìn)樣多針,。用待測物對新柱平衡,,目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

4,、測定多肽,,一般采用什么柱子?流動相是乙腈和水,還有微量的TFA,。特別是像類似三肽的短肽,,應(yīng)該怎么選擇柱子?
答:分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定,,也有用離子交換柱,、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

5,、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時,,很傷柱子,如使用一段時間后,,柱效降低,,峰形改變,如何恢復(fù),?
答:氨基柱測酸性樣品,,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,,導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0NH3的乙腈-(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%,。

6,、色譜柱的技術(shù)都有哪些?比如封尾等,,這些技術(shù)在應(yīng)用時都體現(xiàn)在哪里,?
答:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,,填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響,。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單,不同固定相,、不同粒徑,、不同柱管內(nèi)徑和長度,裝柱工藝都有所不同,,要裝出緊密、穩(wěn)定,、均一的柱床,,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累,。
國內(nèi)和國外想比,,我認(rèn)為色譜柱的差距在于:國內(nèi)公司以前都不會自己開發(fā)填料,一般買國外現(xiàn)成填料裝柱,買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里,。另外因?yàn)檠b柱歷史短,,經(jīng)驗(yàn)積累少,裝柱工藝也沒有*達(dá)到國外水平,。另外,,對色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠,國產(chǎn)的還不過關(guān),,在純度,、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比,差距很大,。

7,、色譜柱技術(shù)的差距在哪里?
答:液相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序,,可能還有一些運(yùn)氣,。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮,。然后用瞬間高壓壓實(shí),,這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體,和合適的壓力,。壓力太大,,顆粒破碎,壓力太小,,塔板數(shù)少,。同時壓力需要穩(wěn)定,不然分布不均,,拖尾嚴(yán)重,。同時還有頭上平整程度。套上套,,就可以用了,。

8、柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢,?原來也討論過這個問題,,我也拆下來清洗過,但我看到柱前段的污染更甚,,于是就用刀片刮了刮,,然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了,,但使用壽命會不會減少呢,?
答:柱頭污染了,,就取出污染的,再裝一些填料,。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍?,那么微觀的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多,,僅表面,,可能就是一些臟物,所以,,問題解決,。但是今后還會有同樣問題,再掛,,那么不小心刮,,影響柱效。建議還是裝一個預(yù)柱,。

9,、如果柱子取下來放置一段時間,需要做什么保護(hù)嗎,?
答:對一般的反相柱,,也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵頭塞緊柱兩頭,,以免保存溶劑揮發(fā),,應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。

10,、流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機(jī)理是什么,?
答:《液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說:甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體,、四氫呋喃是偶極溶劑,,應(yīng)該除了極性影響,還有另外的影響因素,,至于分離機(jī)理,,還是比較復(fù)雜的,不能看成是個方法,。

(出處:源于月旭工程師解答,,由網(wǎng)絡(luò)論壇剪切,僅供參考)

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