1,、網(wǎng)上對柱子是否可以反沖一直有爭論,，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以,。反沖后是正者用,，還是反著用。具體到各型號柱子不僅是ODS柱,，其他如正向柱,、氨基柱、離子交換柱等都有解釋,。
答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,，只有兩端篩板孔徑不對稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,，反沖后還是正著用比較好,，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用,，反向沖洗,。

2、我在做方法開發(fā)的時候,用乙腈和水作為流動相,在調(diào)整梯度的時候發(fā)現(xiàn),剛開始用60%乙腈, RT為2.5分鐘,調(diào)到40%乙腈,RT沒有變化,30%也沒有變化,一直調(diào)到20%的時候,RT突然變到了約13分鐘,請問這是什么原因?我用的是離子交換柱. 
答：離子交換柱的保留時間主要由洗脫液的離子強(qiáng)度和pH決定,，你現(xiàn)在講的比較簡單,，需要把你的方法說的詳細(xì)一點(diǎn)才能做具體的分析。譬如分析物是什么情況,，其含有極性電離基團(tuán)和非極性基團(tuán)是什么性質(zhì),？離子交換柱是聚合物基質(zhì)還是硅膠基質(zhì)？水相是什么緩沖鹽,？

3,、對于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的時候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù),？為什么要這樣做,？
答：新柱活化，實(shí)際上是一個平衡的過程,，除了用流動相平衡外,，有時候還必須用所測樣品對新柱進(jìn)行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽,，尤其重要,。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢,，平衡所需時間也相應(yīng)較長,。具體平衡方式也很簡單，多進(jìn)幾次樣品,，直到峰面積和保留時間穩(wěn)定,，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測定。
如果要加快平衡時間,，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針,。用待測物對新柱平衡,，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

4,、測定多肽,，一般采用什么柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA,。特別是像類似三肽的短肽,，應(yīng)該怎么選擇柱子？
答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測定,，也有用離子交換柱,、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

5,、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時,，很傷柱子，如使用一段時間后,，柱效降低,，峰形改變，如何恢復(fù),？
答：氨基柱測酸性樣品,，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,，導(dǎo)致使用一段時間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動相洗去多余氨），之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％,。

6,、色譜柱的技術(shù)都有哪些？比如封尾等,，這些技術(shù)在應(yīng)用時都體現(xiàn)在哪里,？
答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言,，填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響,。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡單，不同固定相,、不同粒徑,、不同柱管內(nèi)徑和長度，裝柱工藝都有所不同,，要裝出緊密、穩(wěn)定,、均一的柱床,，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累,。
國內(nèi)和國外想比,，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會自己開發(fā)填料，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里,。另外因?yàn)檠b柱歷史短,，經(jīng)驗(yàn)積累少，裝柱工藝也沒有*達(dá)到國外水平,。另外,，對色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國產(chǎn)的還不過關(guān),，在純度,、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比，差距很大,。

7,、色譜柱技術(shù)的差距在哪里？
答：液相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序,，可能還有一些運(yùn)氣,。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮,。然后用瞬間高壓壓實(shí),，這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體，和合適的壓力,。壓力太大,，顆粒破碎，壓力太小,，塔板數(shù)少,。同時壓力需要穩(wěn)定，不然分布不均,，拖尾嚴(yán)重,。同時還有頭上平整程度。套上套,，就可以用了,。

8、柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢,？原來也討論過這個問題,，我也拆下來清洗過，但我看到柱前段的污染更甚,，于是就用刀片刮了刮,，然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了,，但使用壽命會不會減少呢,？
答：柱頭污染了,，就取出污染的，再裝一些填料,。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍?，那么微觀的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多,，僅表面,，可能就是一些臟物，所以,，問題解決,。但是今后還會有同樣問題，再掛,，那么不小心刮,，影響柱效。建議還是裝一個預(yù)柱,。

9,、如果柱子取下來放置一段時間，需要做什么保護(hù)嗎,？
答：對一般的反相柱,，也就是洗干凈后放到純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭,，以免保存溶劑揮發(fā),，應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。

10,、流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機(jī)理是什么,？
答：《液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說：甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體,、四氫呋喃是偶極溶劑,，應(yīng)該除了極性影響，還有另外的影響因素,，至于分離機(jī)理,，還是比較復(fù)雜的，不能看成是個方法,。

（出處：源于月旭工程師解答,，由網(wǎng)絡(luò)論壇剪切，僅供參考）