通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,，如血清、血漿,、尿液,、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步,，下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。

1,、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,，處理也比較簡單。

用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置,，使液面橫截面增大,，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g離心20分鐘,，仔細收集上清,。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存,，避免反復凍融,。

采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,，因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性,。

2、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,，標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿,。將上清分裝多份,，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融,。避免使用溶血或高血脂的標本,。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書,，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

3,、  細胞培養(yǎng)上清

取細胞培養(yǎng)上清到離心管,，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質,，取上清,，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融,。

4,、  細胞裂解液

1）  吸去培養(yǎng)板內的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來,。懸浮細胞可省略,。

2）  收集細胞懸液，1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基,，用預冷的PBS潤洗3次。

3）  加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸,。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品,，反復凍融幾次，使細胞充分裂解,。也可將樣品進行超聲破碎,，以達到裂解的目的。

5）  4℃ 10000×g 離心10min,，除去細胞碎片,，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復凍融,。

5、組織勻漿液

1）  將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,，洗去組織表面殘留的血液或雜質,。

2）  將組織塊稱重，記錄后剪碎,，碎塊應盡量小,，便于勻漿得更充分

3）  將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中,。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿,，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整,，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）

4）  吸取勻漿液到離心管,，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清,，-20℃或-80℃保存,，避免反復凍融。

6,、  尿液,、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min,，取上清即可檢測。

總的來說,，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除,。

為了保證檢測的準確性,，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測；4℃保存的樣本應在1周內進行檢測,。

另外,，還應保證樣本不含NaN₃，因為NaN₃會抑制HRP的活性,，從而導致假陰性的結果,。