免疫組化實驗中出現(xiàn)的問題,,*免疫組化實驗成功的關(guān)鍵是抗體,,如果抗體不好,整個實驗就基本上不會成功,。如何選擇抗體成為免疫組化zui頭疼的問題,,因為一旦實驗不成功將浪費我們辛苦收集來的樣本,今天讓上海恒遠與您分享一下如何選擇抗體這個問題,!
1,、一抗質(zhì)量是酶免疫組化、免疫熒光和Western blotting等試驗中的zui關(guān)鍵因素之一,。從免疫組化選擇抗體來說,,質(zhì)量的公司可能是Chemicon,、upstate、Abcam,、Dako公司等,;從Western blotting選擇抗體來說,信價比的可能是Abcam公司,,一般都1ml,,價格在2000元每株左右。而一抗訂購中選擇原則有1)選擇單克隆還是多克隆抗體,,前者特異性好,,而后者靈敏度高;2)選擇何種種屬來源,?一般兔來源的多是多克?。欢∈髞碓吹亩嗍菃慰寺?,但也有另外,。這也決定了你的二抗類型。3)檢測何種種屬的抗原,,即species reactivity:Hu-human, Ms-mouse, Rat, Goat, Rb-rabbit, Shp-sheep等,;這個很重要。4)抗體類型:IgG1/IgG2a/IgM?一旦一抗選為IgM,,那么你二抗就必須是抗IgM,;5)應(yīng)用范圍:WB, IP, IF, IHC(P), ELISA?一抗說明書中注明抗體可以應(yīng)用于western blotting、免疫沉淀,、免疫熒光,、免疫組化(石蠟切片)、ELISA等等,,這根據(jù)你實驗?zāi)康木駬瘛?)抗體公司的選擇,,主要根據(jù)信價比的高低以及高質(zhì)量文獻數(shù)據(jù)支持。
2,、二抗選擇:一般有生物素標(biāo)記,、HRP標(biāo)記和熒光素標(biāo)記的二抗等多種。一抗種屬選擇好后,,那么二抗只能是某種抗一抗種屬來源的抗體,如果是酶免疫組化,,則可以選擇Bio-或HRP-標(biāo)記,,可以買不同公司單獨的抗體,也可購買二抗染色試劑盒,,包括二抗,、SP等,;而免疫熒光則可以選擇熒光素標(biāo)記的二抗,可以買美國Abcam公司等熒光素二抗,,質(zhì)量還不錯,。zui后,建議大家可能還是在排除方法,、切片中抗原有無等前提下來客觀,、正確評價各種抗體的質(zhì)量。
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