數(shù)字PCR方案介紹

傳統(tǒng)的熒光定量PCR,，經(jīng)過多年的發(fā)展,，已是很成熟的實驗方案了。其中,，zui常用的是Taqman法和SYBR Green法,。而在這二種方法當中，Taqman法又以其特異性高,、定量,，得到廣大用戶的認可。

但是Taqman法PCR,，它還是一個相對定量的辦法,。它測的是一個Ct值，也就是PCR到第幾個循環(huán),，熒光強度達到了一個設定值,。

要想用Taqman方法得到：樣本中到底有幾個目標基因的拷貝,，那么還是要再做一個標準品的（qPCR）曲線。才能知道樣本的Ct值落在標準曲線的哪個位置上,。再進一步推算出樣本中的拷貝數(shù)量,。

這樣做，它首先要做一個標準曲線,，那么,，當然它就增加了工作量。另一方面,，因為引入了標準品,，而標準品也多少是有一定誤差的。所以,，實驗中又多引入了一個實驗的誤差變量,。

科學家為了克服傳統(tǒng)定量PCR的上述兩個弱點，那么又新發(fā)明了微滴數(shù)字PCR,。

微滴數(shù)字PCR的原理,，就是把原來一整管的PCR反應液，分散成幾萬個,，甚至幾百萬個極微小的液滴,。這些小微滴同時進行PCR反應，這樣就可以計算出原來的反應液當中,，有多少個目標基因的拷貝了,。

了解了原理之后，我們來看看商業(yè)公司的實現(xiàn)方案,。其中Bio-Rad公司和RainDance公司采用了油包水PCR的方法,，用油把PCR反應液分隔成等體積的小液滴，再進行PCR反應,。Life公司采用了芯片的方法,，在芯片上預制了2萬個小孔，把PCR反應液,，物理地注入到芯片上的小孔中,，密封后，進行PCR反應,。