方法一、GC-MS 法 參照GB 5009.223-2014

摘要：本文參照食品安全國家標準方法《GB 5009.223-2014 食品中氨基甲酸乙酯的測定》 ,，進行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的測定,。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱（堿性硅藻土）進行樣品前處理，GC-MS法測定,，結果表明氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0 μg / kg（取樣2.00g），回收率在98.3%～104.5%,；白酒樣品的日間精密度測試，RSD<3%,。方法簡單,，產品穩(wěn)定，結果準確靈敏,，*分析檢測的要求,。

       氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一種致癌物,，可以引起肺腫瘤,、淋巴癌、肝癌,、皮膚癌等,。它是發(fā)酵食物和酒*品在發(fā)酵或貯存過程中天然產生的污染物。2007年,，世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機構( IARC) 正式將氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 歸為2A類致癌物,。因此對相關食品中進行氨基甲酸乙酯的檢測和監(jiān)測是非常必要的。

一,、試劑和材料

標準溶液配制

       1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯貯備液：準確稱取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯標準品,，用甲醇定容至10 mL。

       2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：準確吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯標準貯備液0.1 mL,，用甲醇定容至50 mL,。

       1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯貯備液：準確稱取0.5000 g氨基甲酸乙酯標準品，用甲醇定容至50 mL,。 

       分別準確吸取一定量氨基甲酸乙酯標準,，加100 μL  2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL,，得到10.0,、25.0、50.0,、100.0,、200.0、400.0,、1000.0 ng/mL的標準使用液（內含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）

固相萃取柱：Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱（堿性硅藻土）

氣相色譜柱：DA-INNOWAX柱

二,、實驗方法

樣品前處理

   準確量取 2.00 ml 酒樣，加 100 μL  2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯內標使用液,、氯化鈉 0.3 g（白酒,、醬油不加）,，超聲溶解、混勻,，然后加樣到氨基甲酸乙酯柱上,，讓試樣慢慢滲入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱中，靜置約 10 min,，先用 10 mL 正己烷淋洗除雜,，然后用 10 mL 5%乙酸乙酯/乙mi溶液以1 mL/min 流速洗脫并收集于10 mL 具塞刻度試管中，在室溫下用氮氣緩緩吹至0.5mL 左右,，用甲醇定容至1.0 mL 制成測定液供GC/MS分析,，同時做空白,。

GC-MS條件

       色譜柱：DA-INNOWAX氣相柱,，30 m*0.25 mm*0.25 μm；

       進樣口溫度：220℃,；柱溫：初溫 50℃,，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180,，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min,；

       載氣：氦氣，純度≥99.999％

       流速：1 mL/min,；

       電離方式：EI源,。

       離子源溫度：230℃；

       進樣方式：不分流進樣,；

       樣量：1-2μL,；

       氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測離子（m/z）： 62、76,、89,；定量離子62；

       D5-氨基甲酸乙酯選擇監(jiān)測離子（m/z）64,、76,；定量離子64

三、實驗結果

色譜圖

圖1 氨基甲酸乙酯及內標總離子圖

圖2 氨基甲酸乙酯質譜圖

3 內標 D5-氨基甲酸乙酯質譜圖

標準曲線

酒樣加標的回收率及精密度

表1 白酒樣品加標的回收率及精密度

表2 白酒樣品日間精密度

注：相同的樣品,，,，每天測定2次，連續(xù)7天內測定數據

方法檢出限

   當試樣取2.00g時,，本方法氨基甲酸乙酯檢出限為2.0μg/kg,，定量限為5.0μg/kg。

四,、結論

  本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相柱（堿性硅藻土）前處理結合DA-INNOWAX氣相柱進行白酒中氨基甲酸乙酯的測定,，結果表明氨基甲酸乙酯檢出限為2.0 μg/kg,，回收率在98.3% ～ 104.5%，*食品安全國家標準GB5009.223-2014方法的檢測要求,。

五,、訂貨信息

方法二、液相方法-熒光檢測法

一,、原理

在鹽酸中,，氨基甲酸乙酯與9-羥基噸反應，生成具有熒光特性的衍生物,，經色譜柱分離,，熒光檢測器檢測，外標法定量

二,、衍生方法

量取0.02mol/L的9-羥基噸500μL添加到1ml酒精度調整至40%的樣品或標樣中,，然后加入100μL的1.5mol/L HCl中，混勻使反應*,，放暗處衍生至少60min,，過0.45μm濾膜，待測,。

三,、樣品前處理方法：同上

四、色譜條件

       色譜柱：Venusil MP C18,，4.6 mm*250 mm,，5 μm（P/N：VA952505-0）

       流速：0.8 mL/min

       柱溫：30℃

       激發(fā)波長：233 nm

       發(fā)射波長：600 nm

       流動相：A：0.02M乙酸鈉（pH=7.2），B：乙腈,，梯度程序如下

注意事項：

1. 衍生試劑配置完成后,，應4℃避光保存（有效期1個月）

2. 在加樣時，盡量縮短操作時間,，避免衍生試劑見光時間過長分解

3. 該衍生反應需要在暗處進行

4. 衍生時間不得少于30min

5. 流動相pH值要調整準確

    

   五,、訂貨信息