1．先將內(nèi)層滅菌桶取出,，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜,。    

2．放回滅菌桶,，并裝入待滅菌物品,。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果,。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。    

3．加蓋,，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi),。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致,，勿使漏氣,。  

4．用電爐或煤氣加熱，并同時打開排氣閥,，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣,。待冷空氣*排盡后，關(guān)上排氣閥,，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升,。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源,，維持壓力所需時間,。本實驗用 1．05kg/cm2，121．3℃,，20分鐘滅菌,。  

5．滅菌所需時間到后,，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,，當(dāng)壓力表的壓力降0時,，打開排氣閥，旋松螺栓,，打開蓋子,，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時,，打開排氣閥,，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染,。   

6．將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37℃溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長,，即可待用,。  

不過有幾點要注意的： 

1.鍋內(nèi)必須要有充足的水。 

2.鍋的氣密性一定要很好,。  

3.使用完后一定要放到適合溫度才可以打開,。 

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