隨著抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中的廣泛應(yīng)用,，牛奶中抗生素殘留問題日益受到社會的重視,。對此,，檢測技術(shù)也迅速發(fā)展，以尋求簡便,、快速,、準(zhǔn)確、敏感性高的檢測方法滿足日趨嚴(yán)格的殘留*,，保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全,。

　　1.牛奶中抗生素殘留的來源及其危害

　　1.1牛奶中抗生素殘留的來源

　　一般認(rèn)為，對泌乳牛用藥不當(dāng)或不注意安全時間是牛乳中抗生素殘留的重要因素,，尤其是使用乳房灌注法乳腺炎時,，易造成牛乳中抗生素殘留。在牛飼料中添加飼料添加劑已十分普遍,，其中含有一定比例的抗生素,，主要作用是預(yù)防疾病，這是牛奶抗生素殘留的重要原因,。此外,，一些不法交奶戶在高溫季節(jié)為防止乳的酸敗，往往向牛乳中摻雜各種抗生素,，這也是乳中抗生素殘留的一個來源,。1983年，Egan調(diào)查表明,，用經(jīng)抗生素的乳牛用過的擠乳器給正常乳牛擠乳,，可使正常牛的乳中殘留抗生素，所以擠乳是乳中抗生素殘留的另一個來源,。

　　1.2牛奶中抗生素殘留的危害

　　牛奶是老少皆宜的營養(yǎng)品,，牛奶中若含有抗生素，對長期飲用者來說無疑是等于長期服用小劑量的抗生素,，對抗生素有過敏體質(zhì)的人服用殘留抗生素的乳后會發(fā)生過敏反應(yīng),。即使是正常飲用者，體內(nèi)的某些條件性致病菌易產(chǎn)生耐藥性,，一旦患病再用同種抗生素很難奏效,。抗生素是奶牛場乳房炎的常規(guī)藥物,，由于長期大量使用,，使耐藥菌株增加，一些乳房炎病例變得難以用常規(guī)方法治愈,。這種情況又促使臨診獸醫(yī)在過程中加大抗生素的用量,。此外，牛奶中抗生素殘留會影響奶制品品質(zhì),，如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等,，則殘留在其中的抗生素會抑制細(xì)菌的發(fā)酵,，使產(chǎn)量和降低。因此市場不允許出售抗生素殘留過量的牛奶,，同時也造成牛奶*者的經(jīng)濟損失。

　　2.牛奶中抗生素殘留的現(xiàn)狀

　　牛奶中抗生素殘留問題日益受到社會的重視,。1991年底,，美食品藥物管理局（FDA）報告，在234個鮮乳樣品中只有一個樣品檢出磺胺二甲嘧啶,，其殘留量低于10×10－6允許量,。1992年上半年又檢查了197個樣品，結(jié)果有4個樣品檢出磺胺殘留,，但殘留量在安全水平以下,，均沒有檢出四環(huán)素、氯霉素和青霉素,。1990～1991年期間,，美奶業(yè)基金會（Milk Industry Foundation）對牛乳和*乳制品會員廠進(jìn)行全面的藥物殘留檢查，抽查率90％以上,，結(jié)果為：1990年不合格率0.12％,，1991年0.8％；并規(guī)定超過允許量標(biāo)準(zhǔn)的牛乳及其乳制品全部廢棄處理,，不得食用,。歐美多年前即明文禁止抗生素殘留超量的牛奶上市（對青霉素類藥物的*為4～10μg/kg）。

　　我過去對牛奶中抗生素殘留衛(wèi)生指標(biāo)無明文規(guī)定,，直到2001年10月,，農(nóng)業(yè)部發(fā)布實施了《無公害食品生鮮牛乳標(biāo)準(zhǔn)》，對新鮮牛乳的衛(wèi)生指標(biāo)明確了“抗生素不得檢出”,。但對這一標(biāo)準(zhǔn),，我目前并未能嚴(yán)格執(zhí)行，致使我牛奶及奶制品中抗生素殘留問題一直未能得到解決,，以引起了人們對牛奶安全問題的擔(dān)憂,，并成為越來越受關(guān)注的熱點。 1988年,，周樹南對江蘇省8市10個牧場的鮮奶,、消牛奶和奶粉中抗生素殘留情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鮮奶陽性率3.6％,，消牛奶11.4％,，奶粉39.58％。李權(quán)超（1991）,、王曉光（1992）測得長春市市售鮮牛奶中抗生素殘留陽性率3.3％,，可疑率18.3％和2.5％,。張利琴（1999）、常建軍（2000）測得西寧市市售鮮奶中抗生素陽性率分別為2％,、11.7％和5.3％,。 葛華等（1996）對西寧市各類奶樣進(jìn)行調(diào)查，共采集奶樣187份（奶牛場生奶110份,、牛奶公司袋裝消奶35份,、私人沿街售奶42份），檢出有抗生素殘留奶8份,，陽性率4.3％,。王春奕等（1996）檢測的5批25份市售消鮮牛奶中抗生素殘留分?jǐn)?shù)在1.5×l0－9以上，超過了衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合糧農(nóng)組織（FAO）規(guī)定的奶中青霉素含量為0的標(biāo)準(zhǔn),。并認(rèn)為這可能與飼料中添加的抗生素過量和獸醫(yī)臨床大劑量長期使用抗生素有關(guān),。馬群飛等（2002）對福建省生牛乳抗生素殘留情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果86件鮮乳樣中共檢出抗生素殘留陽性樣品17件,，檢出率19.8％,。據(jù)此提出福建省乳牛散養(yǎng)農(nóng)戶*的生牛乳抗生素殘留陽性率較高，應(yīng)通過改善飼養(yǎng)條件和加強監(jiān)測予以控制,。

      從以上情況可以看出,，我牛奶中抗生素殘留現(xiàn)狀并不令人樂觀，有關(guān)部門應(yīng)加強對牛奶*的管理,，并對牛奶中的抗生素等藥物殘留進(jìn)行有效檢測和,，以保證人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全。

 

　　1,、微生物檢測法：

　　微生物檢測法是應(yīng)用較廣泛的方法，其測定原理是根據(jù)抗生素對微生物的生理機能,、代謝的抑制作用,來定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留,，如紙片法（PD）、TTC法,、拭子法（STOP）等,。采用傳統(tǒng)的微生物檢測方法，缺點是：（1）時間長,；（2）顯色狀態(tài)判斷通過肉眼辨別,，易產(chǎn)生，對微紅色者無法做出準(zhǔn)確判斷,；（3）操作復(fù)雜,。優(yōu)點是費用低，一般都能操作。其中,， 紙片法和TTC法是牛奶中藥物殘留檢測的兩種常用的微生物檢測法,。

　　1.1紙片法：

　　紙片法，即PD法（Paper Disc）,。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法,。這兩種方法主要用來檢測牛奶中的β－內(nèi)酰胺類抗生素，其操作過程基本相同,，而選用的菌種不同,。枯草桿菌紙片法檢測的結(jié)果易出現(xiàn)假陽性,，為了確定陽性物質(zhì)是否為青霉素（或β－內(nèi)酰胺類），對加熱后的乳樣用青霉素酶處理,，以滅活乳樣中的青霉素,。然后再行檢測，檢測限可達(dá)0.01 IU/mL,。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測法不僅用于檢測奶樣中β－內(nèi)酰胺類抗生素,，并能暗示是否還存在其它抑菌物質(zhì)，檢測限可達(dá)0.008 IU/mL以下,。一般在4h內(nèi)即可獲得結(jié)果,。因此，在實踐中嗜熱脂肪桿菌紙片法比枯草桿菌紙片法應(yīng)用更為廣泛,。此外,，神保勝彥（1991）對紙片法作了進(jìn)一步研究和改進(jìn)。改進(jìn)后的紙片法不僅能夠確定抗生素的種類,，而且提高了檢出率和準(zhǔn)確性,，氯霉素低檢出量0.01mg/kg，土霉素0.05mg/kg,，鏈霉素1mg/kg,，紅霉素0.05mg/kg，青霉素0.0025mg/kg,。

　　1.2 TTC法：

　　TTC法,，即氯化三苯基四氮唑法（ tripheye tetrazolium chloride），是目前我食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測方法（GB5409—85）,。該法簡便,、快速，無需特殊設(shè)備,，3～4h可見報告,，很適合牧場、乳品廠及食品衛(wèi)生檢測部門采用,。檢測各種抗生素所用的TTC法試驗的靈敏度（低檢出量）分別為：青霉素0.004 U/mL,，鏈霉素0.5 U/mL,，慶大霉素0.4 U/mL，卡那霉素5 U/mL,。

　　目前趨向研究更為靈敏,、準(zhǔn)確、簡便,、快速的微生物檢測方法,。如美和加拿大，使用拭子法和牛的抗生素和磺胺實驗法（CAST）,。此外,，美近年來補充的一個新的實驗方法－快速抗生素篩選法（FAST）。 盡管這些快速微生物檢測法有時會產(chǎn)生一些假陽性,，但在某種程度上是允許的,；如產(chǎn)生這類情況，可進(jìn)一步做確證實驗,。

　　2,、理化檢測法：

　　理化檢測方法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測定其含量，如液相色譜法,、氣相色譜法,、質(zhì)譜法、聯(lián)用技術(shù)等等,，能進(jìn)行定性,、定量和藥物鑒定，敏感性較高,，但有的檢測程序較復(fù)雜,，有的檢測費用較高。在牛奶中抗生素殘留檢測方面,，常用的理化檢測方法是液相色譜和聯(lián)用技術(shù),。

　　2.1液相色譜

　　液相色譜（HPLC）是目前廣泛應(yīng)用的一種理化檢測方法，它引入了氣相色譜理論,，在技術(shù)上采用了高壓泵,，固定相和高靈敏度檢測器，實現(xiàn)了分離速度快,、效率高和操作自動化,。幾乎所有的化合物包括高性／離子型待測物和大分子物質(zhì)，均可用HPLC進(jìn)行測定,。HPLC的分離機制與常規(guī)柱色譜相同,，但填料更加細(xì)（ф 5～10μm），需高壓泵推動，柱效高（105塔板／m）,，速度快,，靈敏度與GC相近。與GC相比,，HPLC流動相參與分離機制,，其組成、比例和pH值等可靈活調(diào)節(jié),，如離子對色譜,、膠束色譜、手性分離色譜等,，使許多難分離的待測物得以分析,。反相HPLC發(fā)展快，目前已成為大多數(shù)抗生素殘留的常規(guī)分析方法,。主要原因是：（1）化學(xué)鍵合固定相（C18或C8）性質(zhì)穩(wěn)定,，不淋失；（2）使用水,、甲醇或乙腈等水溶性有機溶劑作流動相，不干擾紫外檢測,，成本低,；（3）樣品中性雜質(zhì)先流出，只需待測物出峰后即可重復(fù)進(jìn)樣,，分析速度快,。

　　常用的檢測方式為濃度型的紫外檢測器和熒光檢測器。紫外檢測器（UVD）普及,，其次是熒光檢測器和電化學(xué)檢測器（EChD）,。由于奶樣中藥物殘留量少，背景干擾往往很嚴(yán)重,，因此一般都通過柱前衍生反應(yīng)來提高紫外檢測器檢測殘留的靈敏度,。彭莉等報道了用液相色譜法（HPLC）檢測牛奶中氯霉素的殘留量，采用乙酸乙酯提取牛奶中殘留的氯霉素,，用紫外檢測器在278nm檢測樣品,。平均加收率94.8％，變異系數(shù)< 12.0％,。此方法樣品前處理簡單,、回收率高、實用性強,、檢驗靈敏度高,、重現(xiàn)性好、檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，可作為牛奶中氯霉素殘留檢測的確證方法,。由于大部分抗生素在高于230nm的光譜區(qū)無吸收,，而在低于230nm的紫外區(qū)許多樣本基質(zhì)和流動相產(chǎn)生干擾，需衍生化后測定,，限制了紫外檢測器的應(yīng)用,。但是，大部分抗生素是手性分子,，因此旋光檢測器有很大發(fā)展?jié)摿?。旋光檢測有以下特點：（1）選擇性高，樣本僅需簡單提取即可,；（2）靈敏度高,，利用He－He激光作光源，靈敏度可達(dá)5～10uα水平,；（3）可同時得到流出組分的比旋度[α],，用以定性。目前,，該方法已用于紅霉素,、慶大霉素、羧芐青霉素和吩羧青霉素殘留的測定,。

　　此外,，光二管陣列檢測器（DAD）是近10年來HPLC重要的突破。DAD可同時接收整個光譜區(qū)的信息,，在色譜峰流出同時能進(jìn)行每個瞬間的動態(tài)光譜掃描并快速采集信號,，經(jīng)計算機處理后得到色譜—光譜的三維圖譜，信息量大大增加,。一次進(jìn)樣可得到每個組分峰的定量,、定性和純度信息，靈敏度亦明顯提高,。

　　2.2聯(lián)用技術(shù)

　　各種分析技術(shù)聯(lián)用是現(xiàn)代獸藥殘留分析乃整個分析化學(xué)方法上的發(fā)展特點,。計算機的應(yīng)用加速了這一趨勢。聯(lián)用技術(shù)可揚長避短,，一般集分離,、定量和定性（分子結(jié)構(gòu)信息）于一體，因而特別適用于確證性分析,。常見的聯(lián)用技術(shù),，有TLC－MS、GC－MS,、LC－MS,、CZE－MS,、LC－NMR、SFC－MS等,。TLC－MS是簡單的離線聯(lián)用技術(shù),。GC－MS已相當(dāng)成熟，應(yīng)用相對較多,。但這些聯(lián)用儀價格昂貴,，遠(yuǎn)不如HPLC或GC那樣普及。

　　 MS無疑可作為HPLC的通用型檢測器,。使用微型柱（15×0.3cm id）和適宜的接口技術(shù),，如熱噴霧（TSP）、微粒束（PB）等解決了LC與MS的連接問題,；使用軟電離技術(shù),，如快原子轟擊（FAB）、場解吸（FD）等解決了難氣化物質(zhì)的離子化問題,。LC－MS現(xiàn)在已進(jìn)入實用階段,，其靈敏度較熒光檢測器高1個數(shù)量級，能方便地對ng級的獸藥殘留組分進(jìn)行檢測與結(jié)構(gòu)確證,。LC－NMR還可提供待測物立體化學(xué)方面的信息,。

　　LC/MS是除GC/MS之外的一種集分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng),。LC/MS對高沸點,、不揮發(fā)和熱不穩(wěn)定的化合物分離和鑒定具有的優(yōu)勢。色/質(zhì)聯(lián)用法由于實現(xiàn)了層析分離和檢測聯(lián)機,，可用微電腦控制層析條件、程序和數(shù)據(jù)處理,，其特異性,、靈敏度和重復(fù)性均好，并可一次同時完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測,。其分析方式有直接探頭分析法,、直接液體導(dǎo)入法、GC/MS,、LC/MS聯(lián)用法等,。使用電子轟擊離子化、化學(xué)電離,、快速原子轟擊,、熱噴霧電離、等離子體噴霧,、粒子束電離,、大氣壓化學(xué)電離（APCI）和電噴霧電離（ESI）技術(shù)對不同MS離子源條件下青霉素類藥物分子碎片類型的特征已經(jīng)作了大量的工作,。另外離子阱質(zhì)譜技術(shù)（MS/MS）也已用于鑒別青霉素類藥物。如Straub等使用LC/ES/MS測定了牛奶中的幾種青霉素殘留,。青霉素,，鄰氯青霉素與芐青霉素的低測定限為3～5μg/kg。Kihak 等以NCI方式的LC/PB/MS技術(shù)成功地對牛奶中OTC,、TC與CTC殘留進(jìn)行確證,，方法檢測限為0.02～0.05μg/mL。

　　2.3其它理化檢測方法：

　　牛奶中抗生素殘留檢測方法還有氣相色譜法（GC）,、薄層色譜（HPTLC）,、超臨界流體色譜（SFC）和毛細(xì)管區(qū)域電泳法（CZE）等。這些方法盡管在殘留檢測中不常用,，但因其各自*的性能,，能彌補常用方法中不足之處。如GC有許多高靈敏,、通用性或一性強的檢測器供選用,，如氫焰離子化檢測器（FID）、氯磷檢測器（NPD）等,，檢測限可達(dá)μg/kg級,；HPTLC的斑點原位掃描定量、定性和分離材料（Φ3～10μm）改變了常規(guī)TLC在靈敏度和重現(xiàn)性方面的不足,，但保持了TLC的簡便,、快速和樣品容量大的優(yōu)點，可使用正相或反相板,，分辨率幾乎與HPLC相當(dāng),，在抗生素殘留的快速篩選性檢測方面應(yīng)用廣泛；SFC可彌補GC和HPLC的不足,，方便地連接各種靈敏的檢測器（MS,，ECD等）；CZE是90年代以來研究活躍的分析技術(shù)之一,，兼有高壓電泳的高速,、高分辨和HPLC靈活、的優(yōu)點,，柱效高達(dá)105塔板／m,。 Nishi等（1989，1990）使用CZE和MEKC成功地分離了十幾個β－內(nèi)酰胺類抗生素,。CZE將在簡化樣本前處理,、多殘留分析和分析自動化方面發(fā)揮重要作用。目前CZE的主要問題是樣品量太小,，限制了檢測的靈敏度,。CZE－MS可能是的解決辦法,。

　　此外，隨著接口技術(shù)的顯著改進(jìn),，質(zhì)譜作為一種流速型檢測器,，正廣泛應(yīng)用于殘留分析的檢測中。電化學(xué)檢測器也已用于檢測鄰氯青霉素,、頭孢菌素和青霉素,。

　　3、免疫法：

　　目前藥物殘留免疫分析技術(shù)主要分為兩大類：一為相對立的分析方法,，即免疫測定法（immunoassays,，IAs），如RIA,、ELISA,、固相免疫傳感器（soindphase immunosensor ）等；二是將免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用,，如利用免疫分析的高選擇性作為理化測定技術(shù)中的凈化手段,，典型的方式為免疫親合色譜（immunoaffinity chromatogrphy,IAC）。與常規(guī)的理化分析技術(shù)相比,，免疫分析技術(shù)突出的優(yōu)點是操作簡單,，速度快、分析成本低,。以使用微量滴板的ELISA為例,，免疫測定法取樣量小，前處理簡單,、容量大,，儀器化程度低，檢測奶與GC/MS或GC/ECD相似,，可方便地達(dá)到ng/g～pg/g級,，分析效率則為HPLC或GC的幾十倍以上。目前大部分抗生素已經(jīng)建立了免疫測定法,，如磺胺二甲基嘧啶,、氯霉素,、沙拉沙星,、鏈霉素、四環(huán)素,、莫能菌素等,。

　　免疫分析能與其他技術(shù)聯(lián)用。在聯(lián)用方法中,，免疫分析技術(shù)既可作為HPLC或GC等測定技術(shù)的樣品凈化或分離手段,，如IAC/HPLIAC/GC,、HOIAC/HPLC；也可作為其離線或在線檢測方法,，如HPLC/IA,、TLC/IA、CZE/IA,、SFC/IA,、FIA/IA等，這些方法結(jié)合了免疫分析的選擇性,、靈敏度與HPLC,、GC等技術(shù)的高速、分離和準(zhǔn)確檢測能力,，使分析過程簡化,、分析成本下降，拓展了待測物范圍,。在HPLC/IA等分析中,，IA一般作為離線檢測方法。又稱免疫圖譜法（immunograms）,，適用于液相檢測器無響應(yīng)或分離困難的殘留組分的檢測,。FIA/IA可以實現(xiàn)IA的動態(tài)、實時和自動檢測,，分析速度快,，已發(fā)展為一種門的免疫測定技術(shù)－FIIA。

      ELISA試劑盒是目前奶牛場和牛奶公司使用廣泛,、快速,、靈敏的檢測抗生素殘留的方法。外*各類抗生素試劑盒成本較高,，如德拜發(fā)公司*的抗生素檢測試劑盒,，一個96次檢測試劑盒要花3800元，每個樣品的檢測要花50元左右,。天邁*的各類抗生素試劑盒相對來說成本較低,，大約比進(jìn)口產(chǎn)品成本降低30-50%。

 

針對目前乳品供應(yīng),、收購以及乳品加工廠特點，杭州天邁推出“牛乳抗生素快速檢測系統(tǒng)”,！

 

 

2.1 檢測時間短,，5-10分鐘,。

2.2 操作簡單,，不需要人員。

2.3 檢測結(jié)果儀器自動判讀,，避免人為失誤,。

2.4 具有檢測卡拍照功能,，檢測結(jié)果自動存儲,，便于歷史檢測數(shù)據(jù)查詢。

2.5 可出具書面報告,。

2.6 儀器檢測數(shù)據(jù)可上傳系統(tǒng)軟件,。

2.7 根據(jù)客戶需要可增加抗生素檢測項目。

 

 

 

 

      TMYQ-CGR100金標(biāo)讀數(shù)儀是用于乳品中的抗生素及三聚氰胺等金標(biāo)試紙完成檢測反應(yīng)后,，通過對磺胺等金標(biāo)試紙質(zhì)控線C,、檢測線T顏色變化的檢測,。通過對該顏色變化的檢測，可以半定量的分析出乳品中的抗生素,、三聚氰胺等含量,。避免人為判讀所造成的主觀。

      金標(biāo)讀數(shù)儀能夠快速,、準(zhǔn)確地提供乳品中的抗生素,、三聚氰胺等檢測項目的檢測結(jié)果，并可出具檢測報告,，而且還可以把所有檢測數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫,，并可與軟件系統(tǒng)實現(xiàn)對接；免維修,、易操作,；多功能、經(jīng)濟實用,。穩(wěn)定的內(nèi)部校正，耐用的設(shè)計保證了連續(xù)可靠的使用,。

1、部,、省,、市、縣,、鎮(zhèn)各級農(nóng)產(chǎn)品檢測中心。

2,、乳品養(yǎng)殖,、供應(yīng)以及乳品加工企業(yè)。

3,、各級主管部門：農(nóng)業(yè)部門,、,、食品藥品監(jiān)督管理局,、畜牧獸醫(yī)部門等。

4,、大型生鮮市場、超市。

 

1、檢測數(shù)據(jù)自動存儲,；

2,、檢測數(shù)據(jù)可打印中文檢測報告；

3,、可對檢測卡進(jìn)行拍照保存,，避免檢測數(shù)據(jù)作假；

4,、可根據(jù)客戶需要增加沙丁胺醇,、萊克多巴胺等檢測項目；

5,、需客戶自備電腦一臺,。