在進行搖瓶機試驗前,,首先檢查搖瓶機各部件,,檢查氣源、電源,、管路,、壓力表、密封等是否正常,,特別強調(diào)的是搖瓶機做為精度,,高科技的儀器,搖瓶機每個過程都由的程序控制,,所以要求實驗人員在操作前必須對搖瓶機的各個按鈕,,流程熟練掌握,詳細閱讀搖瓶機說明書,,及實驗室儀器安全操作規(guī)程,。掌握了搖瓶機的基本操作要領(lǐng)后,逐步按以下步驟進行搖瓶機細菌培養(yǎng)試驗:
*步:搖瓶機復(fù)蘇:根據(jù)所培養(yǎng)的細菌選擇適宜的培養(yǎng)基,,大部分細菌在LB培養(yǎng)基中在超凈工作臺先用1毫升左右的適宜的培養(yǎng)基溶解冷凍菌,,然后轉(zhuǎn)移到10毫升中試管(放入4毫升液體培養(yǎng)基)中,一般在37攝氏度搖床靜止或低轉(zhuǎn)速培養(yǎng)12小時或者過整晚(溫度取決于所培養(yǎng)的細菌適宜生長的溫度),。
第二步:搖瓶機平板劃線培養(yǎng):在平板(瓊脂+液體培養(yǎng)基)劃線,,放37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)6小時~12小時,在平板上觀察是否形成了單菌落.
第三步:搖瓶機挑單菌落:在超凈臺中挑選典型單菌落,,置入10毫升中試管(內(nèi)有5毫升液體培養(yǎng)基)中,,在37攝氏度搖床,轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)培養(yǎng)12小時或者過整晚,,肉眼能看到試管渾濁,。
第四步:搖瓶機按照1:20的比例將中試管中的菌液移到250毫升三角瓶(放入100毫升液體培養(yǎng)基),培養(yǎng)條件同前,。注意:所有的接種操作均需要在層流罩中,,培養(yǎng)基應(yīng)無菌。
以上四步,,搖瓶機是一般細菌培養(yǎng)都會涉及到的步驟,,有些操作人員在實際搖瓶機試驗過程中有時會省略復(fù)蘇這一環(huán)節(jié),直接拿燒熱的接種環(huán)挑些菌液冰水,,在平板上劃線培養(yǎng),,等長出菌落后,選取合適的菌落搖瓶機培養(yǎng),。另外,,要提醒大家的是:(1)搖瓶機是搖轉(zhuǎn)方式進行混合攪拌,,而發(fā)酵罐是直接機械攪拌;(2)搖瓶機發(fā)酵罐可以取樣或者儀表時時檢測,但是搖瓶機因為量小不能方便的進行控制和檢測,,這些在后邊的文章會詳細介紹到,大家先做初步了解即可,。
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