猴補體3(C3)elisa試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800μg/ml  5 號標準品  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

400μg/ml  4 號標準品  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

200μg/ml  3 號標準品  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

100μg/ml  2 號標準品  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

50μg/ml  1 號標準品  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔,、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。

4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此

重復 5 次，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外,。

7.  溫育：操作同 3,。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色） ,。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行,。