小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中 IgG1 抗體亞型（ IgG1）表達(dá),。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）表達(dá)。用純化的抗原

包被微孔板,，制成固相抗原,，可與樣品中 IgG1 抗體亞型（ IgG1）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未

結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,，經(jīng)

過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值） ，與 CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）的存在與否,。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒組成：

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  陽(yáng)性對(duì)照  0.5ml×1 瓶

3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  陰性對(duì)照  0.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說(shuō)明書  1 份

5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張

6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒操作步驟：

1.  編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔,、空白對(duì)照 1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.  加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測(cè)樣品 10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,，

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此

重復(fù) 5 次，拍干,。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3,。

8.  洗滌：操作同 5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） ,。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） 。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié) ：

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定 ：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）陰性

陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為小鼠 IgG1 抗體亞型（ IgG1）陽(yáng)性,。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M 的硫酸,，使用時(shí)必須

注意安全。

小鼠 IgG1 抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6 個(gè)月