小鼠促紅細胞生成素EPO試劑盒實驗分析

本試劑僅供研究使用  標本：血清或血漿

試驗原理：
小鼠促紅細胞生成素EPO試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知EPO濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將EPO和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B,，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中EPO的濃度呈比例關(guān)系,。

操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9． 小鼠促紅細胞生成素EPO按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

操作步驟
1． 使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi),。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時,。
4． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結(jié)果,。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

小鼠促紅細胞生成素EPO試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的EPO標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的EPO含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。

3、檢測值范圍：0-8.0IU/ml

4,、敏感度： 0.01 IU/ml