人補(bǔ)體因子B（CFB）試劑盒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

本試劑僅供研究使用      標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
人補(bǔ)體因子CFB試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知CFB濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將CFB和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B,，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中CFB的濃度呈比例關(guān)系,。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

樣品收集、處理及保存方法
1,、 血清-----人補(bǔ)體因子CFB操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9． 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

人補(bǔ)體因子CFB試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線(xiàn)性,。樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的CFB標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線(xiàn)，樣品的CFB含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度,。

3,、檢測(cè)值范圍：0-400ug/ml

4、敏感度： 1.0 ug/ml