色譜柱的分離度與色譜柱的長度,、固定相的性質(zhì),、液膜厚度,、載氣流速和性質(zhì),、柱溫均有關(guān)系,。

1分離度R與柱長L的平方根成正比,，因此,，采用較長的色譜柱可以獲得更高的分離度，但相應(yīng)的分析時(shí)間也會(huì)延長,。而且色譜柱越長壓降越大,，柱過長會(huì)增大進(jìn)出口壓力比，相反會(huì)降低分離度,。

2固定相的性質(zhì)與分析物越相似,，分離度就越高。

3從上述公式可以看出,，液膜厚度的增加會(huì)導(dǎo)致塔板高度的增加,，柱理論塔板數(shù)降低，同時(shí)還會(huì)增加分析物在固定相中的分配系數(shù),，理應(yīng)導(dǎo)致分離度的降低,，但事實(shí)上，在分配系數(shù)增加的同時(shí),，△K增加更為顯著,，所以液膜厚度的增加能提高分離度。

4分子質(zhì)量大的載氣的優(yōu)點(diǎn)是擴(kuò)散作用小,，缺點(diǎn)是在柱中壓降大,、流速慢，即分析周期長,。分子量小的載氣傳質(zhì)阻力小,，有利于提高色譜分析速度，但是濃度較高的介質(zhì)易在其間形成擴(kuò)散,，影響分離度,，所以在實(shí)際測量中氫氣、氦氣一般都用于介質(zhì)濃度較低的區(qū)域并提高其流速,，減少擴(kuò)散的影響,。

5色譜柱存在一個(gè)*載氣流速，但實(shí)際分析中為了縮短分析時(shí)間,，流速通常稍大于*流速,。

6提高柱溫能提高分析物在流動(dòng)相和固定相中的擴(kuò)散系數(shù)，降低傳質(zhì)阻力,，加快分析速度,，同時(shí)使得色譜峰變窄、變高,，但會(huì)導(dǎo)致分離度的下降,。

7色譜分離是樣品在流動(dòng)相和固定相中反復(fù)分配的過程，過載后本來該進(jìn)入固定相的樣品在固定相在得不到保留,，就被流動(dòng)相推著往前走,，因此造成了保留變化，因此進(jìn)樣量與分離度也是有關(guān)系的,。