染色體CBG標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)方法原理
異染色質(zhì)在整個(gè)分裂間期及分裂期都是濃縮的,,因而其大小較為恒定,。它們通常位于著絲粒附近,,或在染色體臂上呈現(xiàn)“團(tuán)塊”,,這些染色質(zhì)主要由C顯帶技術(shù)呈現(xiàn),,故稱為C帶,。CBG即C帶、Ba(OH)2,、Giemsa的簡(jiǎn)寫,。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區(qū)有很強(qiáng)抗性,,仍保留大部分DNA,,Giemsa染色后可見(jiàn)效果良好的C帶。
抽取DNA的過(guò)程由三個(gè)連續(xù)操作形成,。首先,,酸處理可使DNA脫嘌呤,但未使DNA骨架斷裂,;其次熱堿處理可使DNA變性,,促進(jìn)繼發(fā)的DNA溶解;zui后,,熱鹽溶液使DNA骨架斷開(kāi)并使碎片溶解進(jìn)入溶液中,。因此,zui終以Giemsa染料顯示出DNA的不同分布,。在優(yōu)良的C帶標(biāo)本中,,常染色質(zhì)只呈現(xiàn)中期染色體的一般外貌,結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)著色很深,。C帶在檢查1,、9、16特別是Y染色體的異質(zhì)區(qū)時(shí)尤為重要,。
實(shí)驗(yàn)材料 染色體標(biāo)本
試劑,、試劑盒 HClBa(OH)2SSCGiemsa染色液
儀器、耗材 恒溫水浴箱染色缸顯微鏡
實(shí)驗(yàn)步驟
一,、用品和試劑
0.2N HCl,,5% Ba(OH)2,2×SSC,,Giemsa染色液,。恒溫水浴箱,染色缸,。其余同外周血染色體制備,。
二、操作步驟
基本方案
1. 酸處理:常規(guī)制作的染色體標(biāo)本(未染色)置0.2 N HCl(室溫)處理15-30分鐘。水洗,。
2. 堿處理:浸入已預(yù)溫至56℃的5% Ba(OH)2水溶液10分鐘,。水洗。
3. 熱鹽處理:置2×SSC溶液(67℃)處理60-90分鐘,。水洗,。
4. 染色:l∶10 Giemsa染色液染色10-5分鐘。水洗,。氣干。
5. 鏡檢,。
替代方案:
1. 酸處理:常規(guī)制作的染色體標(biāo)本(未染色)置0.2 N HCl(室溫)處理60分鐘,。水洗。
2. 堿處理:浸入1% Ba(OH)2水溶液(50℃)中15-20秒,。水洗,。
3. 熱鹽處理:置2×SSC溶液(60℃)90分鐘。水洗三次,。
4. 染色:l∶10 Giemsa染色液染色10分鐘,。水洗。氣干,。
5. 鏡檢,。
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