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ELISA試劑盒在實驗中結果錯誤的原因分析管理

來源:北京雅安達生物技術有限公司   2015年01月22日 16:58  

  ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,,具有靈敏度高,操作簡單等優(yōu)點,,但是在具體實驗過程中影響因素較多,,并且要按照嚴格的說明要求,在臨床檢驗中除正常反應外,,有時??梢姷揭恍╁e誤結果(即假陽性或假陰性結果)。

    ELISA試劑盒引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:①標本因素,;②試劑因素,;③操作因素。本文就標本因素對ELISA測定的影響做如下討論,。
(1)類風濕因子
人血清中IgM,、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性,。ELISA試劑盒解決該情況的辦法是:①用F(ab)2替代完整的IgG,;②標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效),;③檢測抗原時,,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解,。
(2)補體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,,抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,,使C1q 可以將二者連接起來,,從而造成假陽性,。解決的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,,10 min或56℃,,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體,,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,,但加入量不足或亞類不同時無效,。
(4)嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,,有時能與靶抗原結合形成復合物,,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現(xiàn),,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定,。
(5)醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig (s) 抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術,,均有可能使這些病人體內產(chǎn)生抗鼠抗體,;另外,被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產(chǎn)生抗鼠Ig (s) 抗體,。這些病人ELISA測定時均可產(chǎn)生假陽性,。解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠Ig (s) ,,從而克服由于上述原因造成的假陽性,。
(6)交叉反應物質
類AFP樣物質等,是與靶抗原有交叉反應的物質,。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大,,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,,也會出現(xiàn)假陽性結果,。
(7)標本中其它成分的影響 血清脂質過高、膽紅素,、血紅蛋白及血液粘度過大等,,ELISA試劑盒均對ELISA測定結果有干擾作用。

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