（一）原理

IRMA是采用過(guò)量的標(biāo)記抗體與待測(cè)抗原的非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng),，然后加入固相的抗原吸附劑以結(jié)合游離的標(biāo)記抗體，離心去沉淀,，測(cè)定上清液中的放射性強(qiáng)度,，從而推算出待測(cè)樣品的抗原含量。

（二）放射免疫檢測(cè)與免疫放射檢測(cè)(即IRMA與RIA)的區(qū)別 
見(jiàn)表13－4,。
表13－4 IRMA與RIA的區(qū)別
IRMARIA標(biāo)記物質(zhì)抗體抗原標(biāo)記物用量過(guò)量*反應(yīng)方式直接結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合B,、F分離方式固相抗原免疫吸附劑第二抗體等（三）標(biāo)記抗體的制備 特異性抗體的制備，質(zhì)量要求及125I標(biāo)記方法與RIA基本相同,?？贵wIgG分子中含有多個(gè)氨基酸殘基，經(jīng)過(guò)碘化反應(yīng)后,，不影響其免疫學(xué)活性,，并能結(jié)合上較多的碘原子，標(biāo)記物的比放性高,，克服了RIA中某些抗原不易標(biāo)記,，或在標(biāo)記過(guò)程中容易發(fā)生化學(xué)或放射性損傷等缺點(diǎn)。同時(shí)純化的抗體比抗原的純品來(lái)源更為豐富,。標(biāo)記抗體的方法比較單一,，也易于掌握，不同于標(biāo)記抗原,，每一種抗原必須標(biāo)記一次,，且抗原復(fù)雜，多種多樣,，標(biāo)記方法也多種多樣,。如果將抗體分子酶解成Fab片段，形成單價(jià)抗體,，再進(jìn)行標(biāo)記,，這樣其敏感性將顯著高于一般的IRMA,。（四）免疫吸附劑的制備 免疫吸附劑是將高純度的抗原連接在固相載體上而制成。所用固相載體要求對(duì)抗原的結(jié)合力強(qiáng),，對(duì)非特異性蛋白質(zhì)的吸附性能低,，且具有高度的分散性，這樣才能大量地結(jié)合特異性抗體,。一般采用重氮化的纖維素,、溴化氰化的纖維素、瓊脂糖4B珠,、聚丙烯酰胺,、葡聚糖凝膠和玻璃粉等作為抗原吸附劑的固相載體。近年來(lái)發(fā)展建立的雙抗體夾心IRMA法,，用固相抗體代替抗原免疫吸附劑,，反應(yīng)后形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌即可除去游離的剩余標(biāo)記抗體,，簡(jiǎn)化了分離步驟,，并保證了較高的特異性。固相抗體的制備方法有兩種：一種是物理吸附法,，將塑料小珠浸泡在稀釋的抗體中,，用前經(jīng)過(guò)洗滌即可?；蛘邔⒖贵w吸附在塑料試管中,；另一種是采用化學(xué)連接法，將抗體較牢固的結(jié)合,，這樣洗滌時(shí)不易脫落,，塑料小珠浸泡的條件是50mMol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液，抗體的濃度為IgG 0.1μg/ml～100μg/ml,。塑料試管吸附抗體的條件是抗體濃度0.1μg/ml～100μg/ml 37℃,、4h～6h或4℃ 24h。（四）測(cè)定方法根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)的特點(diǎn),，可分為以下幾種類型,。1．直接IRMA法 將待測(cè)抗原與過(guò)量的標(biāo)記抗體進(jìn)行溫育，使二者結(jié)合,。然后加入固相抗原免疫吸附劑再次溫育,，吸附游離的標(biāo)記抗體。離心去除沉淀物,，測(cè)定上清液中放射性強(qiáng)度,。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得知待測(cè)樣品中的抗原含量。2．雙抗體夾心IRMA法 在待測(cè)抗原內(nèi)依次加入固相抗體(或?qū)⒋郎y(cè)品直接加入抗體包被管內(nèi))和標(biāo)記抗體,，反應(yīng)后形成固相抗體(Abl)－抗原－標(biāo)記抗體(Ab2)復(fù)合物,。洗滌除去未結(jié)合的游離標(biāo)記抗體,。測(cè)定固相抗體或載體上免疫復(fù)合物的放射活性，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得待測(cè)得抗原量,。此法僅適用于檢測(cè)有多個(gè)抗原決定簇的多肽和蛋白質(zhì)抗原,。3．間接IRMA法 此法是在上述雙抗體夾心法的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步改良為125I標(biāo)記Ab2的抗體,，反應(yīng)形成的固相抗體(Ab1)－抗原－Ab2－標(biāo)記抗體(﹡Ab3)的四重免疫復(fù)合物。其中標(biāo)記抗體(﹡Ab3)可做為通用試劑,，由于同種Ab2的各種IRMA，省去了標(biāo)記針對(duì)不同抗原的特異性抗體。4．BAS－IRMA法 是將生物素－親和素系統(tǒng)引入免疫放射分析,，建立了新一代IRMA,。此法的zui大優(yōu)點(diǎn)是使用生物素的抗體和以125I標(biāo)記親和素為示蹤劑，可以通用于甾體類,、甲狀腺素,、前列腺素等多種分子物質(zhì)的檢測(cè)。固相半抗原結(jié)合物經(jīng)過(guò)無(wú)水乙醇處理,，結(jié)合非常牢固,，可長(zhǎng)期保存；反應(yīng)和測(cè)定在同一試管內(nèi)完成,，操作十分簡(jiǎn)便,，適用于IRMA技術(shù)自動(dòng)化檢測(cè)。