液相色譜儀流動相和固定相選擇標(biāo)準(zhǔn)

    色譜柱是色譜儀分析系統(tǒng)中的核心,，色譜柱分離度會影響到檢測結(jié)果的速率和準(zhǔn)確性,。美國藥典對色譜法規(guī)定較嚴(yán),，它規(guī)定了色譜柱的長度,，填料的種類和粒度,，填料分類也較詳細(xì),，這樣使色譜圖易于重現(xiàn),；而中國藥典僅規(guī)定填料種類,，未規(guī)定柱的長度和粒度,，這使檢驗(yàn)人員難于重現(xiàn)實(shí)驗(yàn)，在某些情況下還浪費(fèi)時間和試劑,。因此,，在液相色譜儀分析系統(tǒng)中，流動相和固定相的選擇較為重要,。

固定相的選擇

    分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物可選擇極性鍵合相,。氰基鍵合相對雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性。氨基鍵合相具有較強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力,，對某些多官能團(tuán)化合物如甾體,、強(qiáng)心甙等有較好的分離能力；氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用,，故被廣泛用于糖類的分析,，但它不能用于分離羰基化合物，如甾酮,、還原糖等,，因?yàn)樗鼈冎g會發(fā)生反應(yīng)生成堿。二醇基鍵合相適用于分離有機(jī)酸,、甾體和蛋白質(zhì),。

分離非極性和極性較弱的化合物可選擇非極性鍵合相。利用特殊的反相色譜技術(shù)，例如反相離子抑制技術(shù)和反相離子對色譜法等,，非極性鍵合相也可用于分離離子型或可離子化的化合物,。ODS(octadecyl silane)是應(yīng)用的非極性鍵合相，它對各種類型的化合物都有很強(qiáng)的適應(yīng)能力,。短鏈烷基鍵合相能用于極性化合物的分離,，而苯基鍵合相適用于分離芳香化合物。

流動相的選擇

    流動相的性質(zhì)要求：一個理想的液相色譜儀流動相溶劑應(yīng)具有低粘度,、與檢測器兼容性好,、易于得到純品和低毒性等特征。選好填料（固定相）后,，強(qiáng)溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附減少,，相應(yīng)的容量因子k降低；而較弱的溶劑使溶質(zhì)在填料表面吸附增加,，相應(yīng)的容量因子k升高,。因此，k值是流動相組成的函數(shù),。塔板數(shù)N一般與流動相的粘度成反比,。所以選擇流動相時應(yīng)考慮以下幾個方面：

  ①流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)。低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機(jī)相會溶脹或收縮,，從而改變色譜柱填床的性質(zhì),。堿性流動相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。酸性流動相不能用于氧化鋁,、氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng),。

  ②純度。色譜柱的壽命與大量流動相通過有關(guān),，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時,。

  ③必須與檢測器匹配。使用UV檢測器時,，所用流動相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收,，或吸收很小。當(dāng)使用示差折光檢測器時,，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動相,，以提高靈敏度。

  ④粘度要低（應(yīng)<2cp）,。高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴(kuò)散,、傳質(zhì)，降低柱效,，還會使柱壓降增加,，使分離時間延長,。選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動相。

  ⑤對樣品的溶解度要適宜,。如果溶解度欠佳,，樣品會在柱頭沉淀，不但影響了純化分離,，且會使柱子惡化,。

  ⑥樣品易于回收。應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑,。

    流動相的選擇：在化學(xué)鍵合相色譜法中,，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關(guān)。在正相色譜中,，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加,；在反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱,。

正相色譜的流動相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑,。

    反相色譜的流動相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑,，如甲醇,、乙腈、四氫呋喃等,。極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響,。一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求,，且流動相粘度小、價格低,，是反相色譜zui常用的流動相,。但Snyder則推薦采用乙腈-水系統(tǒng)做初始實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榕c甲醇相比,，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高且粘度較小,，并可滿足在紫外185~205nm處檢測的要求，因此,，綜合來看,，乙腈-水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng)。

    在分離含極性差別較大的多組分樣品時,，為了使各組分均有合適的k值并分離良好,，也需采用梯度洗脫技術(shù)。

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