蛋白質測定方法，即考馬斯亮蘭法

1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Bradford法）,，是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的,。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點，因而正在得到廣泛的應用,。這一方法是目前靈敏度zui高的蛋白質測定法,。

工作原理：考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合,，使染料的zui大吸收峰的位置（lmax）,，由465nm變?yōu)?95nm,，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。經研究認為,，染料主要是與蛋白質中的堿性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結合,。
在595nm下測定的吸光度值A595，與蛋白質濃度成正比,。 

優(yōu)點與缺點

優(yōu)點：

（1）靈敏度高,，據估計比Lowry法約高四倍，其zui低蛋白質檢測量可達1mg,。這是因為蛋白質與染料結合后產生的顏色變化很大,，蛋白質－染料復合物有更高的消光系數，因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比Lowry法要大的多,。
（2）測定快速,、簡便，只需加一種試劑,。完成一個樣品的測定,，只需要5分鐘左右。由于染料與蛋白質結合的過程,，大約只要2分鐘即可完成,，其顏色可以在1小時內保持穩(wěn)定，且在5分鐘至20分鐘之間,，顏色的穩(wěn)定性,。因而*不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。
（3）干擾物質少,。如干擾Lowry法的K ,、Na 、Mg2 離子,、Tris緩沖液,、糖和蔗糖、甘油,、巰基乙醇,、EDTA等均不干擾此測定法。
缺點：
（1）由于各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,，因此Bradford法用于不同蛋白質測定時有較大的偏差,，在制作 標準曲線時通常選用 g—球蛋白為標準蛋白質，以減少這方面的偏差,。
（2）仍有一些物質干擾此法的測定,，主要的干擾物質有：去污劑、 Triton X-100,、十二烷基硫酸鈉（SDS）和0.1N的NaOH,。（如同0.1N的酸干擾Lowary法一樣）,。
（3）標準曲線也有輕微的非線性，因而不能用Beer定律進行計算,，而只能用標準曲線來測定未知蛋白質的濃度,。