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微生物學(xué)技術(shù):病毒的雞胚培養(yǎng)

來源:上海北諾生物科技有限公司   2014年08月25日 10:01  

一,、目的要求

掌握雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)新城疫病毒的操作技術(shù)。

二,、器材

1.雞胚 應(yīng)選用健康雞群的受精蛋,,接種雞的雞胚應(yīng)無母源抗體,,以免影響病毒在胚胎中的增殖。實(shí)驗(yàn)用的雞胚多采用9—10日齡的活胚,。

2.接種材料 新城疫I系疫苗

3.各種器械 孵卵器,、照蛋箱、蛋架,、打孔器,、1ml結(jié)核菌素注射器、41/2號(hào)注射針頭,、鑷子,、3%碘酊、75%酒精棉球,、鉛筆,、酒精燈、剪刀,、眼科鑷子,、滅菌的疫苗瓶、滅菌滴管和固體石蠟等,。

三,、內(nèi)容和方法

(一)接種前的準(zhǔn)備

1.雞胚的準(zhǔn)備

本實(shí)驗(yàn)選擇9—10日齡的雞胚,在照蛋時(shí)以鉛筆勾劃出氣室,,于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區(qū)域中,,在血管之間的間隙劃上記號(hào),作為接種部位,;用0,、 1%新潔爾滅把蛋殼搽洗干凈并抹干,再以2%碘酊對(duì)接種部位進(jìn)行消毒,,用75%酒精再擦一遍,,在接種定位出打孔,氣室向上豎放于蛋架上,。

2.病毒接種材料的準(zhǔn)備

要分離培養(yǎng)的病毒材料應(yīng)是無菌的,,因此為達(dá)到材料無菌的目的,,可在每ml接種物質(zhì)中加青霉素和鏈霉素各100—500IU,置室溫中1小時(shí)或冰箱中12—24小時(shí)處理,?;蚪?jīng)濾器除菌。

(二) 接種

絨毛尿囊腔內(nèi)注射:用6號(hào)針頭的1ml注射器吸取新城疫病毒材料,,針頭從已打好的小孔中向雞胚方向插入0.5—-1cm,注入0,、1ml (相當(dāng)0、5羽份),,再加氧化鋅膠布貼封,,再加融化的固體石蠟封口,放回孵化箱中進(jìn)行孵化,,每天翻蛋兩次,,照視一次,,24小時(shí)內(nèi)死亡的舍去,。

(三)收獲

 

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