Inertsil 液相色譜柱檢測(cè)益母草中的鹽酸水蘇堿
中國(guó)藥典2010年版(一部)中,,對(duì)益母草中鹽酸水蘇堿的測(cè)定有如下描述:
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑,以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80:20)為流動(dòng)相,,用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè),,理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計(jì)算不得低于6000。
對(duì)照品溶液的制備取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量,,精密稱定,,加70%乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液,即得,。
供試品溶液的制備取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約lg,,精密稱定,置具塞錐形瓶中,,精密加入70%乙醇25ml,,稱定重量,加熱回流2小時(shí),放冷,,再稱定重量,,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,,濾過(guò),,取續(xù)濾液,即得,。
本品按干燥品計(jì)算,,含鹽酸水蘇堿(C7H13O2.HCl)不得少于0.50%。
為什么需要用丙基酰胺柱來(lái)測(cè)鹽酸水蘇堿呢,?丙基酰胺硅膠基質(zhì)的柱子是什么柱子呢,?
首先我們要了解鹽酸水蘇堿的特性,從鹽酸水蘇堿的結(jié)構(gòu)式來(lái)看,,即可知道鹽酸水蘇堿的極性是非常大的,,普通的反相色譜對(duì)它的保留分離能力較弱甚至不保留,而親水型作用色譜柱一般固定相為極性的固定相,,因此能為強(qiáng)極性的化合物提供良好的保留,,因此是分離這類化合物的*選擇。
親水作用色譜(HILIC)作為一種分離極性化合物的液相色譜模式,,是一種以極性固定相(如硅膠,、烷基酰胺基、二羥丙基,,氨基鍵合硅膠等)及水-極性有機(jī)溶劑為流動(dòng)相的色譜分離模式,,它與正相色譜相似,水是強(qiáng)溶劑,,極性化合物比非極性化合物的保留時(shí)間長(zhǎng),與反相色譜的保留順序恰好相反,。強(qiáng)極性化合物的分離問(wèn)題引起了各個(gè)研究領(lǐng)域的重視,,如藥物分析、代謝組學(xué),、蛋白質(zhì)組學(xué)等研究領(lǐng)域都不同程度地涉及強(qiáng)極性化合物的分離問(wèn)題,,近年來(lái),HILIC 越來(lái)越受到關(guān)注和重視,。
烷基酰胺鍵合硅膠克服了傳統(tǒng)正相色譜柱在水相條件下不穩(wěn)定的缺點(diǎn),,其梯度條件通常是初始為高比例有機(jī)相,逐步加大水相含量,,極性丙基酰胺鍵合硅膠的HILIC色譜柱在反相條件下,,可以有效的保留極性化合物,我公司Inertsil Amide色譜柱,,就是一樣一款非常適合于益母草中鹽酸水蘇堿測(cè)定的柱子,,測(cè)定方法及譜圖如下:
1,、分析條件
色譜柱:Inertsil Amide 250*4.6*5
柱溫:30℃
流速:1.0ml/min
進(jìn)樣量: 20ul
檢測(cè)器:Alltech 3300 ELSD(漂移管溫度:50度、載氣流量1.5L/min)
流動(dòng)相:80%乙腈+20% 0.2%冰醋酸溶液
進(jìn)樣濃度:藥材提取液 1g/25ml提取液
PS:紅字部分為藥典規(guī)定
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