ELISA試劑盒定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù)

操作注意事項(xiàng)

試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法

血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑盒性能1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線(xiàn)性,。樣品線(xiàn)性回歸濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1,、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的Cystatin B標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線(xiàn),，樣品的Cystatin B含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)換算出相應(yīng)的濃度。

3,、檢測(cè)值范圍：0-800nmol/L

4,、敏感度： 1.0 nmol/L