ELISA試劑盒屬固相免疫測定

    在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育,，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng),。
    抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會,，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時間的溫育,。
   溫育常采用的溫度有43℃、37℃,、室溫和4℃（冰箱溫度）等,。37℃是實(shí)驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。ELISA試劑盒在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,，實(shí)驗表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,，產(chǎn)物的生成可達(dá),。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度,，有些ELISA試劑盒試驗在43℃進(jìn)行,，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中夜，以形成zui多的沉淀,。但因所需時間太長,，在ELISA試劑盒中一般不予采用。

使用注意事項

1,、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,，表示試劑可能變質(zhì),。

2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20～25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低,。

3,、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,，重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。

4,、每加一種試劑前需將其搖勻。

5,、在加入底物液A液和底物液B液后,，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到30min,。反之,，則減短反應(yīng)時間。

6,、反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚。

7,、不要使用過了有效日期的ELISA試劑盒;也不要使用過了有效期的ELISA試劑盒中的任何試劑,，摻雜使用過了有效期的ELISA檢測試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

   操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi),，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃,，但具體ELISA試劑盒操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。室溫溫育時,，ELISA試劑盒板只要平置于操作臺上即可,。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。為保證這一點(diǎn),，一個人操作時,，一次不宜多于兩塊板同時測定。