葡聚糖凝膠 LH-20的使用方法
將干粉浸泡于60-70%乙醇中(充分?jǐn)嚢瑁慈タ赡艽嬖诘臍埩粑?,抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱,,不能出現(xiàn)凝膠斷層(否則要重新裝柱),,動(dòng)態(tài)用一倍柱體積的60-70%乙醇淋洗,,再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個(gè)柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止,,如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì),并根據(jù)性質(zhì)確定柱高,。如使用相同的溶劑,,在以后的層析中柱平衡可以省略。
(1) 選擇條件:
梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要,。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中,。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng),,常用正己烷二-氯-甲烷甲醇系統(tǒng),。
(2)飽和層析柱:
用洗脫劑將凝膠搖勻,直立柱身,,讓其自然沉降,,此時(shí)要防止氣泡留在其中。至少半小時(shí)打開開關(guān),,流出幾個(gè)柱體種的洗脫劑,,目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。
(3)樣品處理:
用盡量少的洗脫劑溶解樣品,,常壓過(guò)濾,。
(4)濕法上柱:
這也是要有技巧的步驟。
(5)洗脫:
控制流速,,一般1drop/s以下,,可參見廠家的一些參數(shù);必要時(shí)更改極性(很多時(shí)一個(gè)極性就可以將樣品洗脫完畢),。
(6)再生以備下次使用,。
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