液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法

來源：長(zhǎng)沙科美分析儀器有限公司 2014年06月19日 14:55

液相色譜使用過程中的常見問題及解決方法：

液相色譜技術(shù),HPLC 是近期發(fā)展起來的一種具有高靈敏度,、高選擇性的快速分離,、分析技術(shù).它既能用于微量組分的分析測(cè)定,，又能用于大量的制備分離,，靈活多樣,，應(yīng)用范圍已超過其它各種分離方法,。如果HPLC使用人員能在分析樣品之時(shí)就熟悉常見的問題并加以解決，就能避免許多麻煩,，讓您在HPLC使用過程中輕松應(yīng)對(duì),。

1 液相色譜儀系統(tǒng)
液相色譜儀主要由貯液瓶、泵,、進(jìn)樣器,、柱子、柱溫箱,、檢測(cè)器,、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成（見圖1）。對(duì)于整個(gè)系統(tǒng)而言,，柱子,、泵和檢測(cè)器是核心部件，同時(shí)也是易出問題的主要部位,。

2 液相色譜儀常見問題及解決方法

液相色譜儀作為一種高精密儀器,，如果在使用過程中操作不當(dāng)?shù)脑?就容易導(dǎo)致一些問題，其中zui常見的就是柱壓?jiǎn)栴},、漂移問題,、峰形異常問題。

2.1 柱壓?jiǎn)栴}
柱壓?jiǎn)栴}是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方,，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞,、柱效、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān),。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個(gè)恒定值,，而是指壓力波動(dòng)范圍在345kPa以內(nèi)（在使用梯度洗脫時(shí)，柱壓平穩(wěn),、緩慢的變化是允許的）,。壓力過高、過低都屬于柱壓?jiǎn)栴}。

2.1.1 壓力過高
這是液相色譜儀在使用中zui常見的問題,，指的是壓力突然升高,，一般都是由于流路中有堵塞的情況。此時(shí),，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查,。
①首先斷開真空泵的入口處，此時(shí)PEEK管里充滿液體,，使PEEK管低于溶劑瓶,，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下,，則是溶劑過濾頭堵塞,。處理方法：用30%的硝酸浸泡0.5h，在用超純水沖洗干凈,。如果液體自由滴下,，溶劑過濾頭正常，再檢查,。②打開Purge閥,，使流動(dòng)相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降,，則是過濾頭堵塞,。處理方法：將過濾頭取出，用10%的異丙醇超聲30min,。如果壓力降至690kPa以下,，過濾頭正常，再檢查,。③把色譜柱出口端取下,，如果壓力不下降，則是柱子堵塞,。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞,，則用95%的水沖至壓力正常；如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常,。假如按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,，用流動(dòng)相沖洗柱子,。這時(shí)，如果柱壓仍不下降,，只有換柱子入口篩板,，但一旦操作不慎，很容易造成柱效下降,，所以盡量少用,。

2.1.2 壓力過低
壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個(gè)接口處,，特別是色譜柱兩端的接口,，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣,，但此時(shí)表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),，忽高忽低，更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無法吸進(jìn)液體,。處理方法：打開Purge閥,，用3~5ml/min的流速?zèng)_洗，如果不行,，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出,。

2.2 漂移問題
主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移。

2.2.1 基線漂移
一般說來,，機(jī)器剛啟動(dòng)時(shí),，基線容易漂移，大概要30min的平衡時(shí)間,，如果用了緩沖溶液或緩沖鹽,，還有就是在低波長(zhǎng)下（220nm）平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，但如果在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,，則要考慮下面的原因（見表1）,。

2.2.2 保留時(shí)間漂移
保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志，同一種東西,，兩次的保留時(shí)間相差不要超過15s,，超過了30s可看做保留時(shí)間漂移，就無法進(jìn)行定性,，要考慮以下原因（見表2）,。

2.3 峰形異常問題
峰形問題是液相的主要問題，在做液相過程中,，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰形,，對(duì)于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對(duì)待

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