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流式細胞術測效靶細胞殺傷實驗

來源:上海富眾生物科技發(fā)展有限公司   2010年06月07日 09:10  

做免疫學特別是腫瘤學實驗,,總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷,老外zui常用的是Cr51放射實驗,,但這個方法在國內的不少地方都不能做,而MTT這個方法又太老了,,而且也不準確,,那么替代方法就用流式細胞術,又方便,,又準確,,這也是偶參照老外的方法吧,。

1 計數靶細胞,,并加入CFSE,使CFSE終濃度達到2uM,37度30分鐘,。
2 拿出后,1000rpm,5min,可隱約看到細胞染成黃色,PBS洗三次
3 與效應細胞混培,,作用4-6小時,。
4 將細胞混合液消化取出,洗二次,,PI工作液5ul,,避光30分鐘后上流式
5 CFSE,PI雙陽性的細胞為被殺傷的靶細胞,,除以靶細胞總數,,即為殺傷率。

注意事項:
1,。CFSE及PI的濃度必須注意,,寧低勿高,個人感覺,,如果標高的話,,在4度放一晚好像會好一些
2,。必須設全陰,,CFSE單標,,PI單標,,CFSE+PI雙標并同步化的靶細胞的參照.
3,。作用時間不能太長,,不要超過8個小時,。

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