的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結(jié)果準確可靠的必要條件,。ELISA 的操作因固相載體的形成不同而有所差異,，國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點,。本文將敘述板式ELISA 各個操作步驟的注意要點,，珠式,、管式及磁性球E LSIA ，國外試劑均與特殊儀器配合應用,，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結(jié)果,。

1 標本的采取和保存
可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛,，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液,、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份,。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液）,，有些則需經(jīng)預處理（如糞便和某些分泌物）,。大部分ELISA 檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,，其他成份均同等于血清,。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固,、血塊收縮后即可取得,。除特殊情況外，在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本,。在ELISA 中血漿和血清可同等應用,。
血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血,，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),，以HRP 為標記的ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色,。
血清標本宜在新鮮時檢測,。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP ,，也會產(chǎn)生假
陽性反應,。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合,，在間接法ELISA 中可使本底加深,。
一般說來，在5 天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,，超過一周測定的需低溫冰存,。凍結(jié)血清
融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均,，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡,，可上下顛倒混和,，
不要在混勻器上強烈振蕩,。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,，澄清后再檢測,。反
復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,，宜少量分裝冰
存,。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑,。

2 試劑的準備
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑,。 ELISA 中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的,，應為新鮮的和高質(zhì)量的,。自配的緩沖液應用pH 計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存,。
3 加樣
在 ELISA 中一般有3 次加樣步聚，即加標本,，加酶結(jié)合物,，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA 板孔的底部,，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡,。
加標本一般用微量加樣器,，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,，以免發(fā)生交叉污染,，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法 ELISA ）需用稀釋的血清,，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣,。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本,，然后在微型震蕩器上震蕩1 分鐘以保證混和,。加酶結(jié)合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成,。