前言:我們大家都知道生物實驗中有個重要的實驗就是酶特性的實驗,那么在做實驗時有一個用來對酶進行做標記的儀器就是酶標儀,,我們并不是特別的了解酶標儀,,知識知道它的作用而已,。下面就由小編為大家做一下酶標儀的簡單介紹,,希望對大家了解酶標儀有所幫助,。
酶標儀介紹:主要由光源系統(tǒng),、單色器系統(tǒng),、樣品室,、探測器和微處理器控制系統(tǒng)等組成
酶標儀原理:實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結構和光電比色計基本相同. 如圖是一種單通道自動進樣的酶標儀工作原理圖.
光源燈發(fā)出的光線經過濾光片或單色器后,,成為一束單色光,。該單色光束經過酶標板中的待測標本,被標本吸收掉一部分后,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉換成相應的電信號,。光電檢測器將投照到上面的光信號的強弱轉變成電信號的大小。此電信號經前置放大,、對數(shù)放大,、模數(shù)轉換等處理后,送人微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算,,較為后通過顯示器和打印機輸出測試結果,。
酶標儀的分類:
按照濾光方式的不同可分為:濾光片式的酶標儀和光柵式酶標儀
按照功能可以分為:光吸收酶標儀,熒光酶標儀,化學發(fā)光酶標儀和多功能的酶標儀
濾光片式的酶標儀:采用濾光片來進行波長的選擇,酶標儀內置濾光片輪,可選擇試驗所需的不同波長的濾光片來進行分光,光源發(fā)出的全波譜光經過濾光片后,大部分被過濾,只剩下濾光片本身允許的波長通過,這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長
光柵式酶標儀:采用光柵進行分光,光源發(fā)出的全波譜光線經過光柵后,通過光柵上面分布的一系列狹縫的分光,就可以獲得任意波長的光,波長連續(xù)可調,,一般遞增量為1nm.
光吸收酶標儀:用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測.特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系,由此可以用來定性和定量的檢測,。
熒光酶標儀:用來進行熒光的檢測.通過激發(fā)光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質標定的樣品上后,會發(fā)出波長更長的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達檢測器.熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例
化學發(fā)光酶標儀:來自生物化學反應中的自發(fā)光,可分為輝光型和閃光型兩種類型.輝光型發(fā)光持久,穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間;閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強,需要應用自動加樣器才可以進行
多功能的酶標儀:可以同時進行光吸收,熒光和化學發(fā)光的檢測
優(yōu)缺點:
名稱: | 優(yōu)點: | 缺點: |
濾光片式酶標儀 | 通過選擇不同的濾光片 可獲得不同的波長 | 因濾光片固定所以波長都是固定 并且濾光片價格比較昂貴 |
光柵式酶標儀 | 使用方便靈活可以進行全波長的掃描 | 價格貴 |
光吸收酶標儀 | 檢測檢測技術成熟,成本低,操作簡單 | 動態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強 |
熒光酶標儀 | 靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣 | 易受外界干擾激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響 |
化學發(fā)光酶標儀 | 輝光型發(fā)光持久穩(wěn)定,能持續(xù)一段時間 | 閃光型發(fā)光時間短,變化快,穩(wěn)定性不強 |
多功能的酶標儀 | 功能強大,使用范圍廣避免了重復購買 | 價格昂貴 |
酶標儀安裝環(huán)境要求:
儀器應放置在無磁場和干擾電壓的位置。
儀器應放置在低于40分貝的環(huán)境下,。
為延緩光學部件的老化,,應避免陽光直射。
操作時環(huán)境溫度應在15℃-40℃之間,,環(huán)境濕度在15%-85%之間,。
操作電壓應保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔,,避免水汽,,煙塵。
保持干燥,、干凈、水平的工作臺面,,以及足夠的操作空間,。
酶標儀的檢測流程:
使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性,。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性,。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,,較為后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,,底物被酶催化變?yōu)橛猩a物,,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據(jù)顏色反應的深淺進行定性或定量分析,。由于酶的催化頻率很高,,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。
酶標儀的八大特性功能:
一,、測定波長,。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),。
二,、測定的吸光度范圍。通常,,酶標儀的吸光度測定范圍在,。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,,但現(xiàn)在基本上都做了拓寬,,可達到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性,。
三,、光學系統(tǒng)。酶標儀的光學系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,,亦有單通道)檢測,,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,,有的酶標儀還有一個參比通道,,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統(tǒng)功能如何,,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍,、線性度、精密度和準確度等體現(xiàn)出來,。
四,、檢測速度。酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間,。檢測速度快,,有利于提高檢測的精密度,即避免由于測定過程中,,因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異,。目前市場上常見的酶標儀檢測速度都非常快,,通常在數(shù)秒鐘內,。
五、震板功能,。酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻,,使板孔內顏色均一,。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,,有的可按上下,、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節(jié)。
六,、溫育功能,。溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成,,而無需再外配溫箱,。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能
七,、軟件功能,。軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析并報告結果的功能,。軟件功能是中酶標儀的一個非常重要的功能,。如果硬件方面區(qū)別不大,則軟件就成為判定酶標儀優(yōu)劣的惟一指標,。對于用戶來說,,好的軟件功能,對實際工作會有較大的幫助,。
八,、語言界面。通常進口的中酶標儀人機對話多采用英文,。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難,,從而難以較為大限度地發(fā)揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題,,已有一些酶標儀采用了中文界面
酶標儀使用時注意事項:
在測量過程中,,請勿碰酶標板,以免酶標板傳送時擠傷操作人員的手
請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部,,操作完成后請洗手。
儀器如果接觸過污染性或傳染性物品,,請進行清洗和消毒
洗板要洗干凈,。盡量使用洗板機洗板,避免交叉污染,。
嚴格按照試劑盒的說明書操作,,反應時間準確。
使用加液器進行加液,,加液頭不能混用,。
不要在測量過程中關閉電源。
對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差,可以根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),,以達到較為佳效果,。
使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害,,請嚴格按照試劑盒的操作說明,,以防對操作人員造成損害。
使用后蓋好防塵罩,。
出現(xiàn)技術故障時應及時與廠家,,切勿擅自拆卸酶標儀。
常見故障:
1,、打印機不工作
酶標儀后部DIL開關設置不正確,。
酶標儀內置打印機開關處于開的位置。在總參數(shù)中設置內置打印機為關,。
打印機無紙或紙未裝好,,請裝好打印紙。
打印機未聯(lián)機,,請確認打印機上的聯(lián)機鍵已聯(lián)機
打印機接口接錯(接在了計算機接口上了),。應將打印機接在DIL開關正下方的打印機接口上,RS-232接口為計算機接口,。
打印機聯(lián)線有問題:有些配備的新打印機聯(lián)線仍有問題,,請確保打印機聯(lián)線無問題。
打印機有開機順序,,需先開打印機,,后開儀器;有的需先開儀器,,后開打印機,。
2、調不出所編輯程序
如在臨界值模塊下編輯儲存的程序必須要在臨界值模塊下調出,。
空白或陰性位置不正確,。
肉眼結果與酶標儀測定結果差異較大。
濾光片設置不正確:請在“參數(shù)”中按濾光片輪中實際的情況設置濾光片,。
酶標儀的應用范圍:不僅應用在醫(yī)療行業(yè),,用于酶聯(lián)免疫學的檢測工作,而且在食品衛(wèi)生,,農業(yè),,畜牧等產業(yè)以及各高等院校實驗室中都有廣泛的應用。
在醫(yī)學上采用酶聯(lián)免疫吸附試驗進行血液學,,免疫學,,腫瘤免疫學,,傳染病免疫學,優(yōu)生優(yōu)育的血清學及基因實驗,。檢測項目主要包含以下幾項:
1,,傳染病類:例如肝炎,艾滋病,,衣原體,,肺炎支原體,梅毒,,水痘等
2,,甲狀腺:促甲狀腺激素,T3T4等
3,,不孕癥:性激素六項,,泌乳素,雌三醇,,生長素,,抗精子抗體等
4,優(yōu)生優(yōu)育:弓形蟲抗體,,巨細胞病毒,,風疹病毒等
5,腫瘤標志物:癌胚抗原,,甲胎蛋白,,乳腺癌,卵巢癌,,膀胱癌,,胃腸癌等
6,糖尿?。篊肽,,胰島素,胰島素抗體,,胰島素原等
7,,過敏原,皮膚不耐受等
在食品以及農畜業(yè)的檢測項目包括:營養(yǎng)成分,,添加劑,,農藥殘留量,菌毒素,,無機毒素,抗生素激素殘留,,致癌物質殘留,,有毒有害物質污染等,。
以上就是上海旦鼎貿易有限公司為大家介紹的酶標儀的有關知識,如有需要轉載敬請說明,,謝謝,!
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