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大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒使用說明書

來源:上海將來實業(yè)股份有限公司   2010年05月27日 09:52  

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

 

大鼠白三烯C4LTC4)定量檢測試劑盒(ELISA

使用說明書

                                                                                                                            

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒試劑盒名稱】

大鼠白三烯C4LTC4)定量檢測試劑盒(ELISA

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒試劑盒用途

定量檢測大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中白三烯C4LTC4的含量,。

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒檢測原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠白三烯C4LTC4單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,,顏色的深淺與樣品中大鼠白三烯C4LTC4)濃度呈正相關(guān),,450nm波長下測定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,,計算樣本中大鼠白三烯C4LTC4含量。

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒試劑盒組成

1

酶標(biāo)包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL×6

8

顯色劑B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

樣本稀釋液

6mL

10

說明書

1

5

特殊稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封袋

1

備注:標(biāo)準(zhǔn)品(16號)濃度依次為:200,、100,、5025,、12.5,、6.25 ng/L

 

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材

137恒溫箱

2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5,、一次性試管

6,、吸水紙

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒操作步驟】

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,,室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加,。

4,、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min

5,、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,,空白對照孔不加,。

7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8,、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

9,、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,,再加入顯色劑B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),,37避光顯色15min,。

10、終止:取出酶標(biāo)板,,每孔加終止液50μL,,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11,、測定:以空白孔調(diào)零,,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值),。

12,、計算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,,計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒樣本要求】

1,、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。

2,、標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能立即試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3、樣本應(yīng)充分離心,,不得有溶血及顆粒,。

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒注意事項】

1、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行,,實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,,以減小實驗誤差,。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L,,超過此范圍,,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,,請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果(6.25-200ng/L范圍內(nèi)),,乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6、若顯色過淺,,可適當(dāng)延長底物溫育時間,。

7、為避免交叉污染,,標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,不得碰到微孔,;不得重復(fù)使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,,不同批號的試劑不得混用,。

9、底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。

 

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】

 

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,,37反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,,加入酶標(biāo)試劑,37反應(yīng)30分鐘

 

洗板4次,,加入顯色液A,、B37顯色15分鐘

 

加入終止液

 

15分鐘之內(nèi)讀OD

 

計算

 

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒檢測范圍

6.25ng/L - 200ng/L

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒規(guī)格】

96T/

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒貯藏】

2-8,,避光防潮保存,。

【大鼠白三烯C4LTC4Elisa試劑盒有效期】

6個月

上海江萊生物科技有限公司專業(yè)經(jīng)銷眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的ELISA試劑盒,生物試劑,,抗體,,培養(yǎng)基,血清,。為中國科研試劑供應(yīng)商之一,,質(zhì)量被全國各大院校科研機構(gòu)認(rèn)可,,并為Elisa試劑盒長期供應(yīng)商,,作為戰(zhàn)略合作伙伴。

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