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1加樣

對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,，如果加樣不準就會造成誤差,，尤其當稀釋倍數(shù)大時，很小的誤差,，會導致較大的相對誤差,，使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,，避免加在孔壁上部,，并注意不可濺出，不可產生氣泡,。目前,，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本，可較好地避免以上誤差

2洗滌

在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步,，應引起操作者重視,。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關,，ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的,。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質,。

3 溫育

每種試劑都有其*反應模式,，其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高,，反應時間長,，會造成整板本底高，陽性率高,。溫育一般用濕盒或水浴 ,，反應板不宜疊放,，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā),，板上應加蓋,。

4酶標儀 判讀

作為記錄測定結果的儀器，酶標儀 的性能穩(wěn)定與否,，決定結果的可靠度,。首先酶標儀應定期進行保養(yǎng)，對濾光片要定期校正,；其次酶標儀波長設置要正確,，使用雙波長，一個檢測波長,，一個參比波長,，以消除微孔板底部劃痕、不平,、指印或液面高度差異造成的光干擾,。此外，在用酶標儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條,。由于各種酶標儀性能有所不同,，使用中應詳細閱讀說明書