以抗體包被的夾心法為例,，加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會,，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。ELISA試劑盒37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度．
在建立ELISA試劑盒方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),，實(shí)驗(yàn)表明,，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)物的天生可達(dá),。ELISA試劑盒濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至劃定的溫度,，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如斯?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育,，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng),。這就是為什么ELISA反應(yīng)老是需要一定時(shí)間的溫育。為加速反應(yīng),，可進(jìn)步反應(yīng)的溫度,，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度,。ELISA屬固相免疫測定,，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生,。  
    溫育常采用的溫度有43℃,、37℃、室溫順4℃等,。室溫溫育時(shí)要平置于操縱臺上即可,。這是一個(gè)逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn),。一般有兩次抗原抗體反應(yīng),，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。不管是水浴仍是濕盒溫育,，反應(yīng)板均不宜疊放,，以保證各板的溫度都能迅速平衡。
     保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外,，一般均采用水浴,，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面,，使溫度迅速平衡,。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜籠蓋板孔,，此時(shí)可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。ELISA試劑盒若用保溫箱，應(yīng)放在濕盒內(nèi),，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,，在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上,。應(yīng)留意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按劃定力求正確,。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*,，在放射免疫測定中多使反應(yīng)在冰箱中,，以形成zui多的沉淀。室溫溫育的反應(yīng),，操縱時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在劃定的范圍內(nèi),，尺度室溫溫度是指20～25℃，但詳細(xì)操縱時(shí)可根據(jù)仿單的要求控制溫育,。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如斯,。為保證這一點(diǎn)，一個(gè)人操縱時(shí),，一次不宜多于兩塊板同時(shí)測定.,。但因所需時(shí)間太長，一般不予采用,。